6检测方法

    6.1病毒抗原的检测

    利用免疫电镜(IEM)技术可以检测出潜伏期和急性期的HE病人或实验感染动物的粪便及胆汁标本中的HEV颗粒。标记的抗-HEV抗体可以检测到肝细胞组织中的HEV 特异性抗原。利用Western 印记法可检测出病人血清中的抗HEV IgM 和IgG 抗体。Meng等在PCR基础上建立了快速血清中和试验(rSNA) 方法。

    6.2病毒抗体的检测

    酶联免疫吸附实验( ELISA) 是目前用于检测血清HEV 抗体最常用的方法, 其中以间接ELISA用途最广。用于检测HEV的抗原有组织培养全病毒抗原、合成肽抗原和表达抗原。1991 年美国Grenelabs公司以HEV墨西哥株和缅甸株ORF-3区的一段重组表达多肽为抗原, 首次研制出第一代抗HEV ELISA试剂盒。不久即被Shidmore利用Yarbough构建的ORF-2和ORF-3两个克隆的表达产物作抗原建立的第二代ELISA方法所代替, 第三代检测试剂为真核表达系统产物。不同类型组合的抗原其敏感性和特异性不同。Mast等比较了12种不同组合的重组抗原和合成肽抗原, 血清抗体检测结果发现, 不论是昆虫细胞表达的还是大肠杆菌表达的ORF-2或ORF-2+ORF-3的重组蛋白均表现出较高的敏感性(83%~98%)和特异性(93%~100%), 而合成肽的敏感性(15%~57%)要远远低于重组蛋白, 但特异性仍很高(84%~100%) ......