橄榄油中5种多环芳烃的测定
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文章编号：1004-9231(2008)08-0411-02
(1.上海市浦东新区疾病预防控制中心，上海 200136；2.上海杰诺质量检测技术有限公司，上海 200136)
多环芳烃(PAHs)中包括苯并(a)芘等十几种致癌物质。国家食品卫生标准中规定各类食用油中苯并(a)芘的限值为10μg/kg。国家标准GB5009.27-2003《食品中苯并(a)芘的测定》[1]规定了两种检测方法，分别是荧光分光光度法和目视比色法。我们研究了利用凝胶净化技术进行前处理，用液相色谱法测定橄榄油中苯并(a)芘等5种PAHs的含量[2~4]。该法自动化程度高，有机溶剂使用量少，回收率高，满足相关标准的要求。
1 材料与方法
1.1 仪器
液相色谱仪(HP1100型，荧光检测器，美国安捷伦公司)；液相色谱柱(HPLC-Cartridge 250-3 LiChrospher® PHA 5μ，MERCK公司)；全自动凝胶净化系统GPC(VARIO，德国LCTech公司)；GPC净化柱(填充Bio-Beads S-X3 200～400目)；全自动定量浓缩仪(EVA III，德国LCTech公司)。
1.2 试剂
环己烷，色谱鉴定无干扰杂峰；乙酸乙酯，色谱鉴定无干扰杂峰；乙腈，色谱鉴定无干扰杂峰。标准品：5种PAHs单标[SUPELCO公司，苯并(a)芘，苯并(a)蒽，苯并(b)荧蒽，苯并(g，h，i)北和茚苯(1，2，3-cd)芘]，各化合物浓度均为200 μg/mL。GPC洗脱液：环己烷∶乙酸乙酯=1∶1 。
1.3 测定方法
1.3.1 GPC方法 流速5 mL/min，洗脱共计4 000s，收集时间段为2 100s～3 300s 。
1.3.2 液相色谱条件 流速为0.6 mL/min，柱温为25 ℃，进样量为20 μL。以乙腈和水梯度洗脱(表1)，不同特征波长检测(表2)。
1.3.3 标准曲线的绘制 用乙腈稀释配制混合标准系列，浓度系列为0、5、10、25、50、100 ng/mL；分别取1.0 μL注入液相色谱仪测定，每个浓度重复6次，以保留时间定性，以峰面积的均值分别对各毒物的含量绘制标准曲线。
1.3.4 样品前处理 准确称取5 g橄榄油，以环己烷溶解定容至10 mL。取5 mL直接通过GPC净化洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、氮吹至净干，乙腈定容至0.20 mL待测。
1.3.5 样品测定 在标准曲线测定的相同条件下，分别取1.0 μL样品提取液和试剂空白对照注入液相色谱仪测定。以保留时间定性，测得样品峰面积值后由标准曲线查得各毒物的含量。
计算：C=c×v×n / m
式中C为样品中PAHs的浓度(μg/kg)，c为由标准曲线查得提取液中PAHs的含量(ng/mL)，v 为提取液定容体积(mL)，n为稀释倍数，m为取样质量(g)。
2 结果与讨论
2.1 GPC条件
根据分段收集实验测定，PAHs分布于2 100s～3 300s的时间段。
2.2 色谱柱选择
选择PAHs专用分析色谱柱HPLC-Cartridge 250-3 LiChrospher® PHA 5μ，该柱能从常见十多种PAHs中较好地分离出苯并(a)芘，苯并(a)蒽，苯并(b)荧蒽，苯并(g，h，i)北和茚苯(1，2，3-cd)芘)，见图1。
2.3 标准曲线
按照本方法选定的条件，苯并(a)芘、苯并(a)蒽、苯并(b)荧蒽、苯并(g，h，i)北和茚苯(1，2，3-cd)芘)的线性相关系数均大于0.999(表3)。
2.4 精密度试验
对某质控样分别测定6次，5种PAHs的测定值均在允许范围内，相对标准偏差(RSD) 均
2.6 试剂本底干扰
试验中发现，GPC洗脱液环己烷和乙酸乙酯的本底杂质会对待测物产生干扰。因此，使用农残级或提纯处理的试剂是保证检测结果准确的关键步骤之一。
采用直接溶解样品，应用GPC凝胶净化技术处理，以液相色谱法测定橄榄油中苯并(a)芘等5种PAHs的含量。该方法操作简便，线性范围、精密度等各项技术指标满足痕量分析的要求。
3 参考文献
[1]GB/T 5009.27-2003，食品中苯并(a)芘的测定[S].
[2]杨红梅，王浩，刘艳琴，等.高效液相色谱法测定肉类食品中苯并芘残留的研究[J].食品研究与开发，2006，27(10)：124-126.
[3]李伟红，戴延灿，周瑶敏，等.高效液相色谱法测定熟肉制品中的苯并(a)芘[J].江西农业学报，2008，20(1)：86-88.
[4]孙艳，杨洪彪，李晨光，等.食品中多环芳烃含量检测方法研究[J].中国卫生检验杂志，2005，15(11)：1319-1320.
(收稿日期：2008-07-27), 百拇医药(詹 铭 李腾峰 俞文清)