幼托机构样品大肠菌群两种检测方法的探讨
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摘要 目的：为全面、系统的了解浦东新区幼儿园内用品用具的卫生状况，保障广大小朋友身体健康，综合评估我浦东新区幼儿园内用品用具的卫生状况，建立并完善对各幼儿园的消毒管理工作。方法：方法1：取样液上清液接种单料乳糖胆盐发酵管3管每管1mL。方法2：用测定剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中，置36±1℃培养24h。并用大肠菌标准菌株作阳性对照实验。结果：方法1总阳性数为15件，方法2总阳性数为16件。阳性对照实验：方法1总阳性数为229件，方法2总阳性数为249件。 结论：方法2较方法1有一定优势，建议将检验标准DB31/8-2004 《托幼机构环境、空气、物体表面卫生要求及检测方法》中“按方法1：取样液上清液接种单料乳糖胆盐发酵管3管”修订为“按方法2：用测定剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中”。
【关键词】幼托机构 物体表面 大肠菌群检测
大肠菌群系指一群在37℃培养24h 能发酵乳糖、产酸产气、需氧的和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指示菌一般特征，故以此作为粪便污染指标评价用品用具的卫生状况。幼托机构的卫生消毒工作，是减少疾病传播和发生的重要措施，关系到小朋友的身心健康，也是浦东新区疾控中心的卫生消毒监测工作对幼儿园的消毒管理的一项重要工作内容。由于小朋友一般直接用手拿东西吃，咬手指等，故幼儿园内用品用具的卫生状况直接关系到小朋友的健康。通过对调查和抽检结果进行汇总、分析，探讨两种大肠菌群检测方法的优劣，以便更好地建立并完善对各幼儿园的消毒管理工作。
1资料与方法
1.1资料 来源浦东新区疾控中心检测2011年1月～2012年5月幼机构卫生消毒效果的检测资料，重复阳性对照试验
1.2 方法 按照卫生部《消毒技术规范》(2002年版)，对物体表面采用涂抹法对浦东新区幼儿园的“餐具、熟食砧板、桌面、玩具、便器坐垫和毛巾” 进行抽样检测；通过两种大肠菌群检测方法，计算用品用具抽检合格率，评价标准按《消毒技术规范》(2002年版)规定的要求评价，不得检出大肠菌群。
方法1：取样液上清液接种单料乳糖胆盐发酵管3管每管1mL，置36±1℃培养24h。【1】
方法2：用测定剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36±1℃培养箱内培养24h。【2】
观察是否产酸产气，若有变黄和气体产生，该管推测性检验阳性。 如不产酸，不产气则为大肠菌群阴性。自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，置36±1℃培养24h。凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告检出大肠菌群。
对840份样品进行两种大肠杆菌培养结果进行统计，结果见表1
阳性对照：细菌繁殖体悬液的制备 取冻干菌种管大肠菌[ATCC25922]，转种至第五代营养琼脂培养基斜面，0.85%生理盐水稀释，比浊测定至0.5的麦氏单位。再用0.85%生理盐水稀释至10-7，10-8，10-9，三个浓度【3】。共比浊测定0.5的麦氏单位20管，每管稀释5次，分别稀释至10-7，10-8，10-9，三个浓度，再取上清液接种单料乳糖胆盐发酵管3管每管1mL，用测定剩余的样液，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中，置36±1℃培养箱内培养24h。结果见表2及表3
2.结果
3.讨论
3.1随着 社会 经济 、科学 技术以及人民生活水平的发展和提高，浦东新区各托幼机构已逐渐认识到卫生消毒工作的重要性，建立并完善了各项消毒工作制度，配备了专人负责和必要的消毒设施，定期规范消毒，使各幼托机构卫生消毒工作基本上趋于规范。浦东新区幼儿园内用品用具的卫生状况良好。方法1和方法2检测结果两种大肠杆菌培养方法总合格率高，阳性数少，由此无法比较两种方法的结果，故未能很好地体现出方法2的优势【4】。
3.2经过阳性对照作进一步研究发现两种大肠杆菌培养方法有统计学差异，方法2较方法1有明显优势，况且方法1较方法2繁琐，检测成本较高。方法1较方法2所用检样量少，理论上更易漏检。为方便实验操作，减少基层单位工作量，节省时间和成本，建议将检验标准DB31/8-2004 《托幼机构环境、空气、物体表面卫生要求及检测方法》中“按方法1：取样液上清液接种单料乳糖胆盐发酵管3管”修订为“按方法2：用测定剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中”。再者公共场所样品茶具、毛巾、浴盆脚盆等样品大肠菌群的测定均使用方法2。
托幼机构是小朋友集聚区域，幼儿时期免疫机制正在发育发展之中，免疫功能低下，是各种传染病的易感人群，所以在托幼机构做好卫生消毒工作，切断病原菌的可能传播途径，是保障小朋友身心健康的重中之重。规范托幼机构卫生消毒工作不是一朝一夕的事情，需要长抓不懈，各部门要分清职责，建立长效监管机制，卫生部门要进一步加强为小朋友创造良好的卫生生活环境【5】。
参考 文献
【1】DB31/8-2004 《托幼机构环境、空气、物体表面卫生要求及检测方法》
【2】GB/T18204 ......
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