将重组质粒置-20℃冷冻保存6个月，分别在每个月取出稀释至100、10-3、10-6进行荧光定量PCR检测，考察质粒标准品的稳定性。

    1.2.8肉制品样本的检测

    采集市售肉制品样本35份，称取25g剪碎后加入225mL 胰大豆肉汤培养基，置37℃增菌2h。吸取待测样本1mL于离心管中，经13000×g离心5分钟，吸弃上清，再加入1mL灭菌去离子水重悬沉淀[6]。随后提取DNA，进行荧光定量PCR检测。同时与培养分离方法作对照。

    2. 结 果

    2.1 质粒标准品的构建结果

    将构建的重组质粒提取DNA得到沙门氏菌的质粒DNA，长度为577bp。将测序结果与Genbank中沙门氏菌invA基因序列进行BLAST比对，符合率达100%。(见图1)经测，质粒DNA的浓度为78 ng/μL，转换得到质粒标准品的原始浓度为2.0×1010 copies/μL。

    2.2 重组质粒荧光定量PCR分析：

    对已构建的重组质粒和8株菌株进行荧光定量PCR检测，结果见图2。重组质粒可收集到明显的荧光信号，Ct值为18.64。阳性对照菌株(鼠伤寒沙门氏菌标准菌株)也可见明显荧光扩增信号指数期，Ct值为20.23。其他菌株作为阴性对照均未见明显扩增信号。由此可见，成功构建含有沙门氏菌invA基因特异序列的重组质粒 ......