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编号:13080924
上海市宝山区2014年非伤寒沙门菌血清型及分子分型分析(2)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《上海预防医学》 2017年第8期
     1.2 仪器

    CHEF Mapper脉冲场凝胶电泳系统和GEL DOC凝胶成像系统为美国BIO-RAD公司设备,比浊仪为法国生物梅里埃公司设备。

    1.3 方法

    1.3.1 病原学检测 沙门菌检测根据感染性腹泻诊断技术:WS271—2007和《上海市感染性食源性疾病监测方案》(2010)中有关病人、食品和粪便环境标本检测程序开展样品处理,增菌分离,菌株初筛和血清分型鉴定。将样品接种于XLD平板划线分离,在(36±1)℃环境中培养18~24 h,同时采用SBG增菌液增菌后,转种于CAS平板,在(36±1)℃环境中培养18~24 h。挑取单个可疑菌落(XLD培养基上中间有黑心,边缘半透明的可疑菌落)CAS平板上有紫红色、圆形可疑菌落,分别接种于肠道综合发酵双管糖,在(36±1)℃环境中培养18~24 h,并做革兰染色试验,清凝集试验,确定为沙门菌后,再进行PFGE分子分型试验。

    1.3.2 PFGE分子分型试验

    ① 制胶。将72株沙门菌和沙门菌H9812(分子量Marker)接种到M-H琼脂上, 37℃培养16~18 h。刮取菌苔,调节浊度,吸取400 μL细菌悬浊液注入1.5 mL eppendorf管中, 每管加入20 μL蛋白酶K,立即取等量1% Seakem Gold(1%SDS)胶加入菌液,混合均匀; 将混合液加入模具中,置室温环境中15 min后待凝固备用。

    ② 裂解菌体细胞。将胶块转移至装有5 mL CLB的screw-cap管中 ......
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