0.01%硫酸阿托品滴眼液的制备及质量标准研究(2)
5.3 方法学考察
5.3.1 线性关系考察 精密吸取阿托品对照品储备液，加水配制成浓度为25.38、50.75、76.13、101.5、126.88、152.25、177.63、203 μg·mL-1的阿托品溶液，过滤后将其注入液相色谱仪，微孔滤膜参数为0.45 um，测定条件为“5.1”项下色谱。分别以對照品溶液浓度(X，ug·mL-1)以及峰面积积分值(Y)为横、纵坐标，将标准曲线制备出来，得回归方程： Y = 25136X – 885.19 ，r = 0.9999，表明在 20～200 ug·mL-1范围内硫酸阿托品显示的线性关系良好。
5.3.2 稳定性考察 取适量本品，参照“5.2.1”项下方法进行供试品溶液的制备，分别在 0、1、2、4、6、12、24 h小时以上述色谱条件为参考进样，对色谱图进行详细记录。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD= 0.38% ，则表明在 24小时内样品有着良好的稳定性。
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5.3.3 精密度考察 取适量相同的供试品溶液，进行连续六次进样，对硫酸阿托品峰面积进行测定。结果显示为RSD = 0.10% ，则表明仪器有着良好的精密度。
5.3.4 重复性考察 平行制备6份供试品溶液，方法以“5.1”项下为准，分别进样。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD = 0.88% ，则表明方法有着良好的重复性。
5.3.5 回收率试验 硫酸阿托品对照品精密称取约 0.008g、0.01g和0.012g，不同克数各3份，将其分别置于容积为100 mL的量瓶中，按处方比例将适量处方量空白辅料加入其中，加水溶解，直至稀释到规定刻度，将其配制成模拟样品溶液，浓度分为低(80 %))、中(100 %)、高(120 %)三个等级。在液相色谱仪注入20 μL，回收率按外标法计算。结果，其平均回收率为102.32%，RSD = 0.91% ，说明该方法可行。回收率试验结果见表1。
6 讨论
, 百拇医药
因为硫酸阿托品分子结构中不存在共轭结构，紫外吸收不明显，鉴于此，参照相关规范[7]，在 210 nm 近紫外波长处对阿托品的含量进行检测，以便于紫外检测器检测。现行[8]的中和滴定法为规格不同的硫酸阿托品滴眼液的质量标准，中和滴定法的突出优势是所需设备仪器较少且操作简单，但缺陷是容易受到标准液、指示剂等的影响，导致结果RSD出现较大偏差。本课题考察了乙腈-庚烷磺酸钠磷酸盐溶液[9]作为流动相在不同比例时的色谱图，结果表明流动相18：82作为洗脱浓度，即可保证阿托品的分离效果不受其它溶剂和杂质峰的影响，各色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳峰形较好。另外通过对流动相pH值的调节，使色谱峰峰形变锐，减小拖尾。本文所采用的方法通过方法学验证后，有着结果准确、灵敏、简便以及专属性好的特点，适用于测定0.01% 硫酸阿托品滴眼液的含量。
参考文献
[1] Gwiazda JE， Hyman L， Norton TT， et al. Accommodation and related risk factors associated with myopia progression and their inter-action with treatment in COMET children[J]. Invest phthalmol VisSci， 2004， 45： 2143-2151.
, 百拇医药
[2] 张世磊，贺艳丽. 眼用制剂中抑菌剂的应用[J]. 食品与药品2010，12(9)：343-345
[3] 催福德. 药剂学[M]. 人民卫生出版社560
[4] 国家药典委员会编. 中华人名共和国药典2015年版四部[M]. 中国医药科技出版社. 2015年：35，77，78， 136
[5] 湖南省医疗机构制剂规范[M]. 湖南科学技术出版社. 2016年：625
[6] 中国医院制剂规范(西药制剂) [S]. 第2版. 1995年：182
[7] 陈希， 张文婷. 硫酸阿托品注射液有关物质和pH值的相关性分析[J]. 今日药学，2016， 26 (2)：112-114, 百拇医药(夏爱波拜如霞汪静李建和)
5.3.1 线性关系考察 精密吸取阿托品对照品储备液，加水配制成浓度为25.38、50.75、76.13、101.5、126.88、152.25、177.63、203 μg·mL-1的阿托品溶液，过滤后将其注入液相色谱仪，微孔滤膜参数为0.45 um，测定条件为“5.1”项下色谱。分别以對照品溶液浓度(X，ug·mL-1)以及峰面积积分值(Y)为横、纵坐标，将标准曲线制备出来，得回归方程： Y = 25136X – 885.19 ，r = 0.9999，表明在 20～200 ug·mL-1范围内硫酸阿托品显示的线性关系良好。
5.3.2 稳定性考察 取适量本品，参照“5.2.1”项下方法进行供试品溶液的制备，分别在 0、1、2、4、6、12、24 h小时以上述色谱条件为参考进样，对色谱图进行详细记录。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD= 0.38% ，则表明在 24小时内样品有着良好的稳定性。
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5.3.3 精密度考察 取适量相同的供试品溶液，进行连续六次进样，对硫酸阿托品峰面积进行测定。结果显示为RSD = 0.10% ，则表明仪器有着良好的精密度。
5.3.4 重复性考察 平行制备6份供试品溶液，方法以“5.1”项下为准，分别进样。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD = 0.88% ，则表明方法有着良好的重复性。
5.3.5 回收率试验 硫酸阿托品对照品精密称取约 0.008g、0.01g和0.012g，不同克数各3份，将其分别置于容积为100 mL的量瓶中，按处方比例将适量处方量空白辅料加入其中，加水溶解，直至稀释到规定刻度，将其配制成模拟样品溶液，浓度分为低(80 %))、中(100 %)、高(120 %)三个等级。在液相色谱仪注入20 μL，回收率按外标法计算。结果，其平均回收率为102.32%，RSD = 0.91% ，说明该方法可行。回收率试验结果见表1。
6 讨论
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因为硫酸阿托品分子结构中不存在共轭结构，紫外吸收不明显，鉴于此，参照相关规范[7]，在 210 nm 近紫外波长处对阿托品的含量进行检测，以便于紫外检测器检测。现行[8]的中和滴定法为规格不同的硫酸阿托品滴眼液的质量标准，中和滴定法的突出优势是所需设备仪器较少且操作简单，但缺陷是容易受到标准液、指示剂等的影响，导致结果RSD出现较大偏差。本课题考察了乙腈-庚烷磺酸钠磷酸盐溶液[9]作为流动相在不同比例时的色谱图，结果表明流动相18：82作为洗脱浓度，即可保证阿托品的分离效果不受其它溶剂和杂质峰的影响，各色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳峰形较好。另外通过对流动相pH值的调节，使色谱峰峰形变锐，减小拖尾。本文所采用的方法通过方法学验证后，有着结果准确、灵敏、简便以及专属性好的特点，适用于测定0.01% 硫酸阿托品滴眼液的含量。
参考文献
[1] Gwiazda JE， Hyman L， Norton TT， et al. Accommodation and related risk factors associated with myopia progression and their inter-action with treatment in COMET children[J]. Invest phthalmol VisSci， 2004， 45： 2143-2151.
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[7] 陈希， 张文婷. 硫酸阿托品注射液有关物质和pH值的相关性分析[J]. 今日药学，2016， 26 (2)：112-114, 百拇医药(夏爱波拜如霞汪静李建和)