I—TAC及其受体CXCR3在乳腺癌组织中的表达及其意义(2)
1.2 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测 I-TAC 及 CXCR3 mRNA的表达:分别收集乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织,并用 Trizol 法提取总RNA。根据TaKaRa RT-PCR试剂盒说明书,进行cDNA合成和PCR扩增。引物根据Medline基因文库用Primer 5.0软件自行设计,目的基因I-TAC引物:上游:5’-CAAGGCTTCCCCATGTTCA-3’;下游:5’-CCCAGGGCGTATGCAAAGA-3’;产物长度为105 bp,退火温度为60℃。CXCR3引物:上游:5’-GCCCAAGAATAGATGCTGACTG-3’下游:5-TGAAAGGAGAAGAGCCTGAAGTG-3’;产物长度为165 bp,退火温度为56℃。内参β-actin的上游引物为:5-CAACGGCTCCGGCATGT-3’,下游引物为:5’-CCACACGCAGCTCATTGTAGAA-3’,预计扩增片段为257 bp,退火温度55℃。产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳、Bio-PAD凝胶成像系统分析电泳条带灰度值 ......
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