外周血细胞黏附分子CD11c、CD18的表达与急性缺血性脑卒中预后的相关性分析(1)
【摘 要】目的：探索外周血细胞黏附分子CD11c、CD18的表达在急性缺血性脑卒中(AIS)中的变化及其相关性。方法：采用回顾性分析方法，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例(病例组)，出院后随访90d，根据改良Rankin评分(mRS)分为预后良好组(mRS≤2分)和预后不良组(mRS≥3)。另选取同期招募的健康体检者120例(健康对照组)。对不同分组受检者的外周血中性粒细胞(PMN)和单核细胞(MNL)表面的CD11c、CD18进行测定，随后对比各组受检者各项数值的差异和相关性。结果：病例组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量显著高于健康对照组(P<0.05)。病例组入院第1、3、7、14天各时间段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表达量均显著高于健康对照组(P<0.05)。病例组PMN表面CD11c、CD18的表达量第1～3天逐渐升高，第3天达到高峰，第7天逐渐下降，但第14天仍高于健康对照组(P<0.05)；MNL表面CD11c、CD18的表达量第1～7天逐渐升高，第7天达到高峰，第14天逐渐下降，但仍高于健康对照组(P<0.05)。预后不良组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量高于预后良好组(P<0.05)。MRS评分与MNL和PMN表面CD18表达量呈正相关性(P<0.05)；且与MNL和PMN表面CD11c表达量也呈正相关性(P<0.05)。结论：MNL和PMN表面CD11c、CD18表达量与AIS预后密切相关，是AIS患者潜在的预后评估标记物。
【关键词】中性粒细胞；单核细胞；急性缺血性脑卒中；预后；相关性
【中图分类号】R565.9 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019(2018)20--01
急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke，AIS)是一種常见的脑卒中类型，具有患病率高、复发率高、致残和致死率高等“四高”的特点，占所有类型脑卒中的69.6%-70.8%，不仅严重损害了患者的生活质量和生命健康，同时也给患者家庭、国家和社会带来巨大经济负担。近年来，随着研究的深入，可发现大部分AIS患者在病情发生、发展中，可出现炎症反应，且在受到外界刺激后，可释放受损脑组织内氧自由基、趋化因子、细胞因子，此项细胞激活，可诱导外周白细胞粘附分子表达和内皮细胞表达，激活胶质细胞，促进外周白细胞对缺血脑组织的浸润，从而进一步释放氧自由基和细胞因子，导致脑组织凋亡、坏死，加重血脑屏障破坏，影响预后[1]。既往研究显示，外周血中性粒细胞(polymorphonuclear，PMN)和单核细胞(mononuclear leukocyte，MNL)表面的CD11c、CD18在AIS的发生和发展中起到重要作用[2]。为了尽早发现患者病情变化，还需加强临床外周血细胞炎症标记物的检测，从而为治疗方案拟定提供科学依据。因此，本研究采用回顾性分析方法，对120例AIS患者实施外周血PMN和MNL表面的CD11c、CD18进行检测，探讨CD11c和CD18的表达量在AIS患者中的变化及其相关性。
1 对象与方法
1.1 对象
本研究经医院伦理委员会批准，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例(病例组)，其中，男71例，女49例；年龄42～76岁，平均(62.18±3.69)岁。入选标准：(1)年龄18-80周岁，性别不限；(2)均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的诊断标准[3]，且经颅脑MRI或CT确诊。(3)临床首次发病，且发病后72h内入院；(4)均无严重抵触情绪或精神家族史现象；(5)无沟通障碍或语言表达障碍；(6)无慢性感染病史；(7)患者或家属签署知情同意书。排除标准：(1)既往卒中或此次合并脑出血的患者；(2)妊娠期或哺乳期妇女；(3)有严重的心、肺、肝、肾及肿瘤性疾病；(4)存在自身免疫性疾病；(5)依从性差、不能按研究方案完成随访者；(6)正在参加其他临床试验。另选取同期招募的健康体检者120例(健康对照组)，其中，男68例，女52例；年龄41～77岁，平均(62.56±3.28)岁。两组受检者在性别和年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 检测项目 藻红蛋白(PE)标记MNL表面CD18的平均荧光强度(MFI)；异硫氰酸荧光素(FITC)标记MNL表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD18的MFI。
1.2.2 检测方法 健康对照组在体检当天，病例组在入院第1、3、7、14天，抽取受检者空腹静脉血5ml，首先将其置入抗凝剂的试管中混均，内含有乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝剂，首先将其分别放入含有20ul FITC标记的PE标记、CD11c单抗标记的FITC、PE标记的阴性对照单抗试管以及全血100ul内，混匀，随后将其放置在常温避光条件下待检，孵育30分钟后，加入2ml专用溶血素，且按照1：10的比例稀释，除去红细胞，对其进行血清分离处理，离心5分钟，保持1000r速度，将上清液丢去，再加入1ml的PBS缓冲液，进行离心处理五分钟，维持1000r速度，连续进行2次，将上清液丢去后，再加入PBS 0.5ml悬浮细胞，调整白细胞数为1×106个待检。最后标记好PE标记的阴性对照单抗、FITC标记、PR标记的CD18单抗、PITC标记的CD11c单抗，所有试剂均由美国Caltag公司提供。
1.3 预后评估标准及随访
通过门诊复诊、信件以及电话方式进行随访。随访时间截止至2018年9月。随访90天时采用改良Rankin量表(mRS)评估病例组预后情况[4]：mRS≤2分为预后良好组(100例)；mRS≥3为预后不良组(20例)。, http://www.100md.com(李陈辰)
【关键词】中性粒细胞；单核细胞；急性缺血性脑卒中；预后；相关性
【中图分类号】R565.9 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019(2018)20--01
急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke，AIS)是一種常见的脑卒中类型，具有患病率高、复发率高、致残和致死率高等“四高”的特点，占所有类型脑卒中的69.6%-70.8%，不仅严重损害了患者的生活质量和生命健康，同时也给患者家庭、国家和社会带来巨大经济负担。近年来，随着研究的深入，可发现大部分AIS患者在病情发生、发展中，可出现炎症反应，且在受到外界刺激后，可释放受损脑组织内氧自由基、趋化因子、细胞因子，此项细胞激活，可诱导外周白细胞粘附分子表达和内皮细胞表达，激活胶质细胞，促进外周白细胞对缺血脑组织的浸润，从而进一步释放氧自由基和细胞因子，导致脑组织凋亡、坏死，加重血脑屏障破坏，影响预后[1]。既往研究显示，外周血中性粒细胞(polymorphonuclear，PMN)和单核细胞(mononuclear leukocyte，MNL)表面的CD11c、CD18在AIS的发生和发展中起到重要作用[2]。为了尽早发现患者病情变化，还需加强临床外周血细胞炎症标记物的检测，从而为治疗方案拟定提供科学依据。因此，本研究采用回顾性分析方法，对120例AIS患者实施外周血PMN和MNL表面的CD11c、CD18进行检测，探讨CD11c和CD18的表达量在AIS患者中的变化及其相关性。
1 对象与方法
1.1 对象
本研究经医院伦理委员会批准，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例(病例组)，其中，男71例，女49例；年龄42～76岁，平均(62.18±3.69)岁。入选标准：(1)年龄18-80周岁，性别不限；(2)均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的诊断标准[3]，且经颅脑MRI或CT确诊。(3)临床首次发病，且发病后72h内入院；(4)均无严重抵触情绪或精神家族史现象；(5)无沟通障碍或语言表达障碍；(6)无慢性感染病史；(7)患者或家属签署知情同意书。排除标准：(1)既往卒中或此次合并脑出血的患者；(2)妊娠期或哺乳期妇女；(3)有严重的心、肺、肝、肾及肿瘤性疾病；(4)存在自身免疫性疾病；(5)依从性差、不能按研究方案完成随访者；(6)正在参加其他临床试验。另选取同期招募的健康体检者120例(健康对照组)，其中，男68例，女52例；年龄41～77岁，平均(62.56±3.28)岁。两组受检者在性别和年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 检测项目 藻红蛋白(PE)标记MNL表面CD18的平均荧光强度(MFI)；异硫氰酸荧光素(FITC)标记MNL表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD18的MFI。
1.2.2 检测方法 健康对照组在体检当天，病例组在入院第1、3、7、14天，抽取受检者空腹静脉血5ml，首先将其置入抗凝剂的试管中混均，内含有乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝剂，首先将其分别放入含有20ul FITC标记的PE标记、CD11c单抗标记的FITC、PE标记的阴性对照单抗试管以及全血100ul内，混匀，随后将其放置在常温避光条件下待检，孵育30分钟后，加入2ml专用溶血素，且按照1：10的比例稀释，除去红细胞，对其进行血清分离处理，离心5分钟，保持1000r速度，将上清液丢去，再加入1ml的PBS缓冲液，进行离心处理五分钟，维持1000r速度，连续进行2次，将上清液丢去后，再加入PBS 0.5ml悬浮细胞，调整白细胞数为1×106个待检。最后标记好PE标记的阴性对照单抗、FITC标记、PR标记的CD18单抗、PITC标记的CD11c单抗，所有试剂均由美国Caltag公司提供。
1.3 预后评估标准及随访
通过门诊复诊、信件以及电话方式进行随访。随访时间截止至2018年9月。随访90天时采用改良Rankin量表(mRS)评估病例组预后情况[4]：mRS≤2分为预后良好组(100例)；mRS≥3为预后不良组(20例)。, http://www.100md.com(李陈辰)
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