浅析红细胞冷凝集对血细胞分析检验的影响
【摘 要】 目的：研究分析红细胞冷凝集对血液分析仪检测的影响和处理方法。方法：对20例红细胞冷凝集标本在3种不同条件下使用全自动血细胞分析仪XE-5000进行检测。结果：20 ℃条件下，20例标本红细胞、白细胞和血小板均有异常报警;37 ℃水浴30 min后，其中15例标本无异常报警，5例标本红细胞、白细胞和血小板均有异常报警;25 ℃条件下37 ℃水浴30 min，20例标本均无异常报警。结论：红细胞冷凝集对WBC、HGB和PLT检测结果基本无影响。对RBC、HCT、MCV、MCH和MCHC检测结果有影响，在日常工作中，应引起重视，并对红细胞冷凝集标本进行科学处理。
【关键词】 冷凝集;血细胞分析仪;冷凝集素
【中图分类号】R249【文献标志码】A【文章编号】1005-0019(2019)12-256-01
血细胞分析仪是临床实验室检查常用的检验仪器之一，血细胞分析结果的质量直接关系到对病人的诊断和分析，但在血常规的日常检测中经常会遇到很多影响因素，例如：血小板假性减少症，红细胞凝集(冷凝集)，脂血/溶血，有核红细胞，白细胞增多，疟疾，采样、抗凝不当等。因此，在血常规的检测过程中做好质量控制是至关重要的。为了及时发现和准确排除红细胞冷凝集对血细胞分析仪的影响，该实验选择了从2015年1月—2017年5月共20例红细胞冷凝集的标本在3种不同条件下检测：①普通室温(20 ℃);②37 ℃水浴30 min后立即检测;③25 ℃条件下37 ℃水浴30 min后立即检测，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 仪器与试剂 日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪及配套原装试剂、日本奥林巴斯光学株式会社生产的双筒显微镜。原厂配套正常浓度和高浓度质控品。
1.1.2 标本 从2015年1月—2017年5月抚顺矿务局医院住院患者血常规标本中，通过镜检筛选出20例红细胞冷凝集标本。所有标本均按常规全血细胞检测，血细胞分析仪每半年校准一次。每日测定正常浓度和高浓度2个浓度的质控品，结果均在控。标本通过静脉采血2 mL，加入EDTA-K2抗凝的真空管内，轻轻地颠倒混匀。于采集后4 h内，在XE-5000全自动血液分析仪检测完毕。其中男性12人，女性8人。其中包括肺炎支原体10例，传染性单核细胞增多症3例，多发性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病 2例，恶性淋巴瘤2例。
1.2 方法 将20例红细胞冷凝集的标本采用不同的方法处理后，在日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪检测。血液分析仪所使用的试剂为原厂配套。显微镜为日本奥林巴斯光学株式会社生产。瑞士吉姆萨染液由贝索生物技术公司提供。①普通室温(20 ℃); ②37 ℃水浴30 min;③25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min。记录3种不同条件下红细胞﹑红细胞压积、血红蛋白﹑红细胞各项参数﹑白细胞﹑血小板的值。该仪器以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，电阻抗法测定红细胞和血小板，比色法测定血红蛋白。以上3种方法检测的同时观察管壁红细胞聚集的情况，检测各推两张血涂片，瑞士吉姆萨染色，双筒显微镜镜检。
1.3 统计方法 使用SPSS17.0软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验。
2 结果
红细胞冷凝集的标本在3种不同的环境下检测时可发现：普通室温时，红细胞、白细胞、血小板均有异常报警(Agglut和Turb/Hb)。红细胞直方图可见异常的大红细胞峰。管壁上有细砂粒样凝集颗粒;血涂片发现血膜上有许多细小颗粒，显微镜下可见红细胞大量聚集在一起。
37 ℃水浴30 min后， 15例标本未发现抗凝管管壁有凝集颗粒，试管壁上的小片状凝块消失，红细胞分布图形正常，无报警信息。镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。其余5例标本仍然提示红细胞、白细胞、血小板有异常报警(Agglut和Turb/Hb)，红细胞直方图异常。
室温25 ℃时，标本37 ℃水浴30 min后，20例标本均未出现报警信息。管壁无凝集颗粒，镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。
①普通室温(20 ℃)和37 ℃水浴30 min 的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义(P>0.05)。而红细胞、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P<0.05);②37℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义(P>0.05)。而红细胞、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
冷凝集素是冷反应型抗红细胞抗体，在受冷后可使红细胞出现聚集[1]。在0～4 ℃時最易和红细胞膜抗原结合，是较强的使红细胞凝集的一种自身免疫性抗体，可存在于正常人的血清中，抗体多数是IgM型。低效价的冷凝集素一般无临床意义，通常16 ℃以下可使红细胞发生凝集，30 ℃以上不发生凝集[2]。这种自身凝集反应是可逆的，当环境温度升高后，凝集的红细胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗体，但滴度较低，在1∶16以下。正常情况下，不会导致不良反应。但当机体处于感染等病理情况时，机体的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反应。很多疾病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原体感染、癌症、白血病、妊娠等都可以出现冷凝集反应。
综上所述当遇到疑似冷凝集标本，如RBC，HGB比例严重不符时(正常人HGB和RBC的比例为30∶1)，首先观察试管内标本状态，仔细观察红细胞分布的直方图和出现的报警信息，同时检测冷凝素的效价。当标本确定为冷凝集后，37 ℃水浴30 min后，可以利用空调提高室内的温度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影响。在日常工作中，尤其是冬天温度较低的时候，经常会遇到标本发生冷凝集情况。正确识别和处理冷凝集标本的异常检测结果，对临床准确评估患者的病情非常重要。
参考文献
[1] 程鲁京，薛华月，王卉.寒冷凝集素对血细胞分析干扰的排除[J].武警医学院学报，2000，9(4)：280.
[2] 陈忠，张莉尼.7例抗IgM国内文献综合分析[J].临床检验杂志，2002， 20(2)：93.
[3] 林军，单卫民，赵胜.冷凝集素综合征引起配血困难一例分析[J].临床检验杂志，2000，18(2)：112., http://www.100md.com(张春辉)
【关键词】 冷凝集;血细胞分析仪;冷凝集素
【中图分类号】R249【文献标志码】A【文章编号】1005-0019(2019)12-256-01
血细胞分析仪是临床实验室检查常用的检验仪器之一，血细胞分析结果的质量直接关系到对病人的诊断和分析，但在血常规的日常检测中经常会遇到很多影响因素，例如：血小板假性减少症，红细胞凝集(冷凝集)，脂血/溶血，有核红细胞，白细胞增多，疟疾，采样、抗凝不当等。因此，在血常规的检测过程中做好质量控制是至关重要的。为了及时发现和准确排除红细胞冷凝集对血细胞分析仪的影响，该实验选择了从2015年1月—2017年5月共20例红细胞冷凝集的标本在3种不同条件下检测：①普通室温(20 ℃);②37 ℃水浴30 min后立即检测;③25 ℃条件下37 ℃水浴30 min后立即检测，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 仪器与试剂 日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪及配套原装试剂、日本奥林巴斯光学株式会社生产的双筒显微镜。原厂配套正常浓度和高浓度质控品。
1.1.2 标本 从2015年1月—2017年5月抚顺矿务局医院住院患者血常规标本中，通过镜检筛选出20例红细胞冷凝集标本。所有标本均按常规全血细胞检测，血细胞分析仪每半年校准一次。每日测定正常浓度和高浓度2个浓度的质控品，结果均在控。标本通过静脉采血2 mL，加入EDTA-K2抗凝的真空管内，轻轻地颠倒混匀。于采集后4 h内，在XE-5000全自动血液分析仪检测完毕。其中男性12人，女性8人。其中包括肺炎支原体10例，传染性单核细胞增多症3例，多发性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病 2例，恶性淋巴瘤2例。
1.2 方法 将20例红细胞冷凝集的标本采用不同的方法处理后，在日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪检测。血液分析仪所使用的试剂为原厂配套。显微镜为日本奥林巴斯光学株式会社生产。瑞士吉姆萨染液由贝索生物技术公司提供。①普通室温(20 ℃); ②37 ℃水浴30 min;③25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min。记录3种不同条件下红细胞﹑红细胞压积、血红蛋白﹑红细胞各项参数﹑白细胞﹑血小板的值。该仪器以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，电阻抗法测定红细胞和血小板，比色法测定血红蛋白。以上3种方法检测的同时观察管壁红细胞聚集的情况，检测各推两张血涂片，瑞士吉姆萨染色，双筒显微镜镜检。
1.3 统计方法 使用SPSS17.0软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验。
2 结果
红细胞冷凝集的标本在3种不同的环境下检测时可发现：普通室温时，红细胞、白细胞、血小板均有异常报警(Agglut和Turb/Hb)。红细胞直方图可见异常的大红细胞峰。管壁上有细砂粒样凝集颗粒;血涂片发现血膜上有许多细小颗粒，显微镜下可见红细胞大量聚集在一起。
37 ℃水浴30 min后， 15例标本未发现抗凝管管壁有凝集颗粒，试管壁上的小片状凝块消失，红细胞分布图形正常，无报警信息。镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。其余5例标本仍然提示红细胞、白细胞、血小板有异常报警(Agglut和Turb/Hb)，红细胞直方图异常。
室温25 ℃时，标本37 ℃水浴30 min后，20例标本均未出现报警信息。管壁无凝集颗粒，镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。
①普通室温(20 ℃)和37 ℃水浴30 min 的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义(P>0.05)。而红细胞、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P<0.05);②37℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义(P>0.05)。而红细胞、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
冷凝集素是冷反应型抗红细胞抗体，在受冷后可使红细胞出现聚集[1]。在0～4 ℃時最易和红细胞膜抗原结合，是较强的使红细胞凝集的一种自身免疫性抗体，可存在于正常人的血清中，抗体多数是IgM型。低效价的冷凝集素一般无临床意义，通常16 ℃以下可使红细胞发生凝集，30 ℃以上不发生凝集[2]。这种自身凝集反应是可逆的，当环境温度升高后，凝集的红细胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗体，但滴度较低，在1∶16以下。正常情况下，不会导致不良反应。但当机体处于感染等病理情况时，机体的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反应。很多疾病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原体感染、癌症、白血病、妊娠等都可以出现冷凝集反应。
综上所述当遇到疑似冷凝集标本，如RBC，HGB比例严重不符时(正常人HGB和RBC的比例为30∶1)，首先观察试管内标本状态，仔细观察红细胞分布的直方图和出现的报警信息，同时检测冷凝素的效价。当标本确定为冷凝集后，37 ℃水浴30 min后，可以利用空调提高室内的温度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影响。在日常工作中，尤其是冬天温度较低的时候，经常会遇到标本发生冷凝集情况。正确识别和处理冷凝集标本的异常检测结果，对临床准确评估患者的病情非常重要。
参考文献
[1] 程鲁京，薛华月，王卉.寒冷凝集素对血细胞分析干扰的排除[J].武警医学院学报，2000，9(4)：280.
[2] 陈忠，张莉尼.7例抗IgM国内文献综合分析[J].临床检验杂志，2002， 20(2)：93.
[3] 林军，单卫民，赵胜.冷凝集素综合征引起配血困难一例分析[J].临床检验杂志，2000，18(2)：112., http://www.100md.com(张春辉)