细胞蜡块在IgG4相关性桥本甲状腺炎诊断中的应用价值
【摘 要】 目的： 探讨细胞蜡块在IgG4相关性桥本甲状腺炎细针吸取细胞学检查中的应用价值。方法：对3例IgG4相关性桥本甲状腺炎和5例非IgG4相关性桥本甲状腺炎的细针穿刺细胞进行涂片并制作细胞蜡块，通过免疫组织化学方法观察分析IgG和IgG4的表达情况。结果：涂片中IgG及IgG4的表达均为阴性，非IgG4相关性桥本甲状腺炎细胞蜡块切片IgG及IgG4的表达均为阴性;IgG4相关性桥本甲状腺炎细胞蜡块IgG及IgG4均可见阳性表达，表达阳性细胞率分别为4%-7%和2%-3%。结论： 细胞蜡块在IgG4相关性桥本甲状腺炎的筛查中具有重要的诊断意义。
【关键词】 细胞蜡块;IgG4相关性桥本甲状腺炎;细针吸取细胞学
【中图分类号】 R446.9 【文献标志码】A 【文章编号】1005-0019(2019)19-026-02 甲状腺细针吸取细胞学检查(fine needle aspiration FNAC)因其准确、快速、方便、安全性高的特点，已广泛用于临床。细胞学检查在IgG4相关性桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis，IgG4 HT)诊断中的应用，目前未发现有相关报道。此研究尝试探讨细胞蜡块检测在IgG4 HT诊断中的应用价值。
1 材料与方法
1.1 临床资料 潍坊市中医院2012-2018年因甲状腺占位入院患者，选取超声检查考虑桥本甲状腺炎，并且外周血TPOAb和TgAb升高，同时有FNAC、细胞蜡块和术后常规病理资料的病例共8例。
1.2 方法
1.2.1 细针吸取制片 10ml一次性干燥注射器(7号针头)快速经皮肤刺入肿块，取部分吸出物制成涂片4张，95%酒精迅速固定，分别行HE和免疫组织化学染色。
1.2.2 细胞蜡块制备 将针头及针管内剩余部分立即用4%甲醛20ml反复抽吸冲洗入50ml尖底塑料试管内后，以3000 r/分钟离心15分钟;此时可见细胞小团块组织聚集在试管尖底部。用刀切取出细胞块，再进行常规固定、脱水、石蜡包埋及连续切片，行HE和免疫组织化学染色。
1.2.3 免疫组化试剂 选用迈新单克隆抗体IgG、IgG4，Envision二步法对常规涂片、细胞切片及术后常规切片进行免疫组化染色，已知阳性片作阳性对照，PBS液替代一抗作阴性对照。
1.2.4 样本分组并观察分析 根据术后常规明确诊断，并分为IgG4 HT组和非IgG4 HT组，对比观察涂片及细胞蜡块切片中阳性细胞占全部细胞比例。
2 结果
HE染色制片，3例IgG4 HT及5例非IgG4 HT細胞学涂片中，可见极少或缺乏浆细胞。细胞蜡块切片中，IgG4 HT组可见浆细胞存在，所占细胞百分比分别为5%、6%和8%，非IgG4 HT组浆细胞百分比均低于2%。术后组织切片中，IgG4 HT组可见多量浆细胞及淋巴细胞存在，浆细胞百分比分别为7%、7%和8%;非IgG4 HT组可见大量淋巴细胞及少许浆细胞存在，浆细胞百分比均低于3%。
免疫组化检查，3例IgG4 HT及5例非IgG4 HT细胞学涂片中，IgG及IgG4表达均为阴性。细胞蜡块切片中，IgG及IgG4阳性表达于浆细胞的胞膜和胞浆(图3)。IgG4 HT组IgG阳性细胞数所占百分比分别为4%、5%和7%，IgG4阳性细胞数所占百分比分别为2%、3%和3%;非IgG4 HT组IgG及IgG4表达均为阴性。术后组织切片中，IgG4 HT组IgG阳性细胞数所占百分比分别为5%、6%和7%，IgG4阳性细胞数所占百分比分别为2%、3%和4%;非IgG4 HT组IgG及IgG4表达均为阴性。
3 讨论
细胞蜡块与传统细胞涂片相比，细胞集中，背景清晰，清除部分血细胞及炎症细胞，不会出现细胞重叠拥挤、厚薄不一的现象，在一定程度上，提高了细胞学诊断的阳性率。细胞蜡块最大特点是标本易于保存，可以连续切片，除常规细胞染色外，还可进行免疫组织化学、免疫荧光、原位杂交及分子基因检测等[1]，更好的满足诊断需要。而传统涂片免疫组化细胞成分复杂，有较强的非特异性背景着色，三维细胞团易于抗体及探针的进入，产生假阳性。同时脱落细胞有完整的细胞膜，虽经乙醇固定，其胞膜上的类脂质不能充分融解，影响试剂的渗透造成阳性细胞着色不良[2.3]，影响结果判断。
有文献认为，由于甲状腺穿刺样品细胞量较少，因此，细胞蜡块仅在6%-31%的甲状腺病变中具有诊断价值[4]。回顾本组的制片和免疫组化情况，细胞蜡块切片IgG和IgG4检测的阳性率均明显优于FNAC涂片，定位准确，显示出较高的实用推广价值。尤其是作为术前的检测结果，对临床治疗方案的选择具有一定意义，若能结合临床特征及外周血IgG4检测，指导意义更大，值得推广应用。
参考文献
[1] 尹迎春，王新美，李良，等.非小细胞肺癌胸腔积液细胞蜡块检测EGFR与K-ras基因突变和EML4-ALK融合基因及其临床病理特征[J].中国胸心血管外科临床杂志，2015，22(9)：870-874.
[2] 祝佳，朱涛.细胞块石蜡切片在脱落细胞学中的应用[J].浙江临床医学，2006，8(10)：1100.
[3] Fetsch P A，Simsir A，Brosky K，Abati A. Comparison of three commonly used cytologic preparations in effusion immunocytochemistry[J].Diagn Cytopathol，2002，26(1)：61-63.
[4] Jain D，M alhur S R，lyer V K.Cell blocks in cytopathology：a review of preparative methods， utilify in diagnosis and role in ancillary studies[J].Cytopathology，2014，25(6)：356—371., http://www.100md.com(王晓琳 王昭顺 付振鹏)
【关键词】 细胞蜡块;IgG4相关性桥本甲状腺炎;细针吸取细胞学
【中图分类号】 R446.9 【文献标志码】A 【文章编号】1005-0019(2019)19-026-02 甲状腺细针吸取细胞学检查(fine needle aspiration FNAC)因其准确、快速、方便、安全性高的特点，已广泛用于临床。细胞学检查在IgG4相关性桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis，IgG4 HT)诊断中的应用，目前未发现有相关报道。此研究尝试探讨细胞蜡块检测在IgG4 HT诊断中的应用价值。
1 材料与方法
1.1 临床资料 潍坊市中医院2012-2018年因甲状腺占位入院患者，选取超声检查考虑桥本甲状腺炎，并且外周血TPOAb和TgAb升高，同时有FNAC、细胞蜡块和术后常规病理资料的病例共8例。
1.2 方法
1.2.1 细针吸取制片 10ml一次性干燥注射器(7号针头)快速经皮肤刺入肿块，取部分吸出物制成涂片4张，95%酒精迅速固定，分别行HE和免疫组织化学染色。
1.2.2 细胞蜡块制备 将针头及针管内剩余部分立即用4%甲醛20ml反复抽吸冲洗入50ml尖底塑料试管内后，以3000 r/分钟离心15分钟;此时可见细胞小团块组织聚集在试管尖底部。用刀切取出细胞块，再进行常规固定、脱水、石蜡包埋及连续切片，行HE和免疫组织化学染色。
1.2.3 免疫组化试剂 选用迈新单克隆抗体IgG、IgG4，Envision二步法对常规涂片、细胞切片及术后常规切片进行免疫组化染色，已知阳性片作阳性对照，PBS液替代一抗作阴性对照。
1.2.4 样本分组并观察分析 根据术后常规明确诊断，并分为IgG4 HT组和非IgG4 HT组，对比观察涂片及细胞蜡块切片中阳性细胞占全部细胞比例。
2 结果
HE染色制片，3例IgG4 HT及5例非IgG4 HT細胞学涂片中，可见极少或缺乏浆细胞。细胞蜡块切片中，IgG4 HT组可见浆细胞存在，所占细胞百分比分别为5%、6%和8%，非IgG4 HT组浆细胞百分比均低于2%。术后组织切片中，IgG4 HT组可见多量浆细胞及淋巴细胞存在，浆细胞百分比分别为7%、7%和8%;非IgG4 HT组可见大量淋巴细胞及少许浆细胞存在，浆细胞百分比均低于3%。
免疫组化检查，3例IgG4 HT及5例非IgG4 HT细胞学涂片中，IgG及IgG4表达均为阴性。细胞蜡块切片中，IgG及IgG4阳性表达于浆细胞的胞膜和胞浆(图3)。IgG4 HT组IgG阳性细胞数所占百分比分别为4%、5%和7%，IgG4阳性细胞数所占百分比分别为2%、3%和3%;非IgG4 HT组IgG及IgG4表达均为阴性。术后组织切片中，IgG4 HT组IgG阳性细胞数所占百分比分别为5%、6%和7%，IgG4阳性细胞数所占百分比分别为2%、3%和4%;非IgG4 HT组IgG及IgG4表达均为阴性。
3 讨论
细胞蜡块与传统细胞涂片相比，细胞集中，背景清晰，清除部分血细胞及炎症细胞，不会出现细胞重叠拥挤、厚薄不一的现象，在一定程度上，提高了细胞学诊断的阳性率。细胞蜡块最大特点是标本易于保存，可以连续切片，除常规细胞染色外，还可进行免疫组织化学、免疫荧光、原位杂交及分子基因检测等[1]，更好的满足诊断需要。而传统涂片免疫组化细胞成分复杂，有较强的非特异性背景着色，三维细胞团易于抗体及探针的进入，产生假阳性。同时脱落细胞有完整的细胞膜，虽经乙醇固定，其胞膜上的类脂质不能充分融解，影响试剂的渗透造成阳性细胞着色不良[2.3]，影响结果判断。
有文献认为，由于甲状腺穿刺样品细胞量较少，因此，细胞蜡块仅在6%-31%的甲状腺病变中具有诊断价值[4]。回顾本组的制片和免疫组化情况，细胞蜡块切片IgG和IgG4检测的阳性率均明显优于FNAC涂片，定位准确，显示出较高的实用推广价值。尤其是作为术前的检测结果，对临床治疗方案的选择具有一定意义，若能结合临床特征及外周血IgG4检测，指导意义更大，值得推广应用。
参考文献
[1] 尹迎春，王新美，李良，等.非小细胞肺癌胸腔积液细胞蜡块检测EGFR与K-ras基因突变和EML4-ALK融合基因及其临床病理特征[J].中国胸心血管外科临床杂志，2015，22(9)：870-874.
[2] 祝佳，朱涛.细胞块石蜡切片在脱落细胞学中的应用[J].浙江临床医学，2006，8(10)：1100.
[3] Fetsch P A，Simsir A，Brosky K，Abati A. Comparison of three commonly used cytologic preparations in effusion immunocytochemistry[J].Diagn Cytopathol，2002，26(1)：61-63.
[4] Jain D，M alhur S R，lyer V K.Cell blocks in cytopathology：a review of preparative methods， utilify in diagnosis and role in ancillary studies[J].Cytopathology，2014，25(6)：356—371., http://www.100md.com(王晓琳 王昭顺 付振鹏)
参见：首页 > 医疗版 > 疾病专题 > 内分泌科 > 甲状腺疾病 > 甲状腺炎