DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的临床应用价值研究
【摘 要】分析并研究DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的临床应用价值。方法：本次实验共有60例患者结核分枝杆菌阳性样本参与实验。本次实验使用DNA微阵列芯片法对药结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性进行检验，研究DNA微阵列芯片法和传统检验方法的一致性。结果：两种方法对核分枝杆菌利福平的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(6+53)/60=98.33%;两种方法对核分枝杆菌异烟肼的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(4+55)/60=98.33%;。结论：使用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性和传统方法具有一致性，可以快速、简便、准确的检测出结核分枝杆菌的耐药性，值得在临床医学中大力推广使用。
【关键词】DNA微阵列芯片法;结核分枝杆菌;利福平;异烟肼;检测
【中图分类号】R446.5【文献标志码】A【文章编号】1005-0019(2020)07-078-01
我国结核流行病的普查研究表明，我国的肺结核患者耐药性严重，通常治疗结核分枝杆菌的方法是使用利福平和异烟肼，但是由于利福平和异烟肼的泛滥，导致结核分枝杆菌的耐药性上升[1]。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料
本次实验共有60例患者结核分枝杆菌阳性样本参与实验，所有患者结核分枝杆菌样本均来自于我院2018年11月至2019年11月收治的结核分枝杆菌患者。其中共有患者60例，男性患者32例，女性患者28例;年龄分布为14-65岁，平均年龄为(40.19±12.57)岁。
1.2 实验方法
本次实验使用改良的罗氏培养法，使用对硝基苯甲酸记性菌种的鉴定，然后对鉴定为阳性的菌株使用浓度法进行测验。DNA微阵列芯片法使用的是北京博奥生物有限公司的药物敏感检测试剂盒，具体操作应严格说明书进行检测。关于核酸的提取应该在试管中加入80(l的核酸提取液，然后再使用无菌技术加入一个结核分枝杆菌落，对试管使用Extractor 36 核酸快速提取仪依次进行为期5min的震荡、5min的90度水浴和1min的5000r/min离心[2]。然后进行过PCR扩增，其中每个样品需要设置3个孔，在其中分别加入18(lPCR扩增试剂1、18(lPCR扩增试剂2、18(lPCR扩增试剂3，分别命名PCR产物1、PCR产物2、PCR产物3，然后依次进行扩增[3]。最后进行芯片杂交，具体方法为：加热杂交缓冲液至50度，然后在两支试管中分别加入9(l的杂交缓冲液，将3(lPCR产物1和3(lPCR产物2进行混合，取名为A;将3(lPCR产物1和3(lPCR产物3进行混合，取名为B;在95度的环境中将杂交反应的混合物加热5min，然后进行3min的冰浴。将13.5(l的杂交反应的混合物中加入物质A，最后在50度恒温水浴中进行120min的培养[4]。
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1.3 统计学方法
本次实验使用统计学软件SPSS 21.0进行相关的统计学数据处理。
2 结果
2.1 两种方法检测结核分枝杆菌利福平的耐药性
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌利福平的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(6+53)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌利福平的灵敏度=6/7=85.71%，特异度=53/53=100%，详见表1。
2.2 两种方法检测结核分枝杆菌异烟肼的耐药性
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌异烟肼的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(4+55)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌异烟肼的灵敏度=4/5=80.00%;特异度=55/55=100%，详见表2。
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3 讨论
针对核分枝杆菌耐药性，通常使用的耐药性检测方法是使用培养法为基础的绝对浓度法或比例法，但是这两种方法通常需要进行2-3个月的培养才能够得出结果，严重延误患者的用药，对患者的生命健康具有消极意义，本次实验使用的DNA微阵列芯片法通常可以在2-4周内对对药物的敏感性完成测试。同时DNA微阵列芯片法的特点是操作简便、短暂快捷、准确性高。目前快速检验的方法通常是利用分子生物学，WTO推荐使用线性探针，而DNA微阵列芯片法和线性探针很相似，均是通过检测两种抗结核一线药物进行研究是否耐药的，分别为利福平的rpoB位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点[5]。
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌利福平的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(6+53)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌利福平的灵敏度=6/7=85.71%，特异度=53/53=100%;两种方法对核分枝杆菌异烟肼的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(4+55)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌异烟肼的灵敏度=4/5=80.00%;特异度=55/55=100%。
, 百拇医药
综上所述，使用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性和传统方法具有一致性，可以快速、简便、准确的检测出结核分枝杆菌的耐药性，值得在临床医学中大力推广使用。
参考文献
[1]陈蕾， 王凤平， 徐俊驰， et al. 非结核分枝杆菌病实验室诊断方法分析及临床应用[J]. 中国实验诊断学， 2019(6)：935-939.
[2]何进伟， 张燕飞， 汪明星， et al. 利用基因芯片检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的研究[J]. 辽宁医学杂志， 2017(6)：25-27.
[3]楊敏， 于潞， 吴长新， et al. 高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究[J]. 中国预防医学杂志， 2019(3)：161-164.
[4]罗晶晶， 于霞， 马异峰，等. 高强度荧光分枝杆菌噬菌体Φ2GFP10检测结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性的价值[J]. 中华结核和呼吸杂志， 2017， 40(10)：755-759.
[5]翁绳凤， 李宁， 邢俊蓬， et al. Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及利福平耐药性的应用价值研究[J]. 分子诊断与治疗杂志， 2019(3)：229-232., 百拇医药(孔繁慧)
【关键词】DNA微阵列芯片法;结核分枝杆菌;利福平;异烟肼;检测
【中图分类号】R446.5【文献标志码】A【文章编号】1005-0019(2020)07-078-01
我国结核流行病的普查研究表明，我国的肺结核患者耐药性严重，通常治疗结核分枝杆菌的方法是使用利福平和异烟肼，但是由于利福平和异烟肼的泛滥，导致结核分枝杆菌的耐药性上升[1]。
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1 资料与方法
1.1 一般资料
本次实验共有60例患者结核分枝杆菌阳性样本参与实验，所有患者结核分枝杆菌样本均来自于我院2018年11月至2019年11月收治的结核分枝杆菌患者。其中共有患者60例，男性患者32例，女性患者28例;年龄分布为14-65岁，平均年龄为(40.19±12.57)岁。
1.2 实验方法
本次实验使用改良的罗氏培养法，使用对硝基苯甲酸记性菌种的鉴定，然后对鉴定为阳性的菌株使用浓度法进行测验。DNA微阵列芯片法使用的是北京博奥生物有限公司的药物敏感检测试剂盒，具体操作应严格说明书进行检测。关于核酸的提取应该在试管中加入80(l的核酸提取液，然后再使用无菌技术加入一个结核分枝杆菌落，对试管使用Extractor 36 核酸快速提取仪依次进行为期5min的震荡、5min的90度水浴和1min的5000r/min离心[2]。然后进行过PCR扩增，其中每个样品需要设置3个孔，在其中分别加入18(lPCR扩增试剂1、18(lPCR扩增试剂2、18(lPCR扩增试剂3，分别命名PCR产物1、PCR产物2、PCR产物3，然后依次进行扩增[3]。最后进行芯片杂交，具体方法为：加热杂交缓冲液至50度，然后在两支试管中分别加入9(l的杂交缓冲液，将3(lPCR产物1和3(lPCR产物2进行混合，取名为A;将3(lPCR产物1和3(lPCR产物3进行混合，取名为B;在95度的环境中将杂交反应的混合物加热5min，然后进行3min的冰浴。将13.5(l的杂交反应的混合物中加入物质A，最后在50度恒温水浴中进行120min的培养[4]。
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1.3 统计学方法
本次实验使用统计学软件SPSS 21.0进行相关的统计学数据处理。
2 结果
2.1 两种方法检测结核分枝杆菌利福平的耐药性
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌利福平的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(6+53)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌利福平的灵敏度=6/7=85.71%，特异度=53/53=100%，详见表1。
2.2 两种方法检测结核分枝杆菌异烟肼的耐药性
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌异烟肼的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(4+55)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌异烟肼的灵敏度=4/5=80.00%;特异度=55/55=100%，详见表2。
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3 讨论
针对核分枝杆菌耐药性，通常使用的耐药性检测方法是使用培养法为基础的绝对浓度法或比例法，但是这两种方法通常需要进行2-3个月的培养才能够得出结果，严重延误患者的用药，对患者的生命健康具有消极意义，本次实验使用的DNA微阵列芯片法通常可以在2-4周内对对药物的敏感性完成测试。同时DNA微阵列芯片法的特点是操作简便、短暂快捷、准确性高。目前快速检验的方法通常是利用分子生物学，WTO推荐使用线性探针，而DNA微阵列芯片法和线性探针很相似，均是通过检测两种抗结核一线药物进行研究是否耐药的，分别为利福平的rpoB位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点[5]。
通过本次实验可得，两种方法对核分枝杆菌利福平的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(6+53)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌利福平的灵敏度=6/7=85.71%，特异度=53/53=100%;两种方法对核分枝杆菌异烟肼的耐药性的检测结果具有一致性，一致性=(4+55)/60=98.33%;DNA微阵列芯片法检验核分枝杆菌异烟肼的灵敏度=4/5=80.00%;特异度=55/55=100%。
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综上所述，使用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性和传统方法具有一致性，可以快速、简便、准确的检测出结核分枝杆菌的耐药性，值得在临床医学中大力推广使用。
参考文献
[1]陈蕾， 王凤平， 徐俊驰， et al. 非结核分枝杆菌病实验室诊断方法分析及临床应用[J]. 中国实验诊断学， 2019(6)：935-939.
[2]何进伟， 张燕飞， 汪明星， et al. 利用基因芯片检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的研究[J]. 辽宁医学杂志， 2017(6)：25-27.
[3]楊敏， 于潞， 吴长新， et al. 高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究[J]. 中国预防医学杂志， 2019(3)：161-164.
[4]罗晶晶， 于霞， 马异峰，等. 高强度荧光分枝杆菌噬菌体Φ2GFP10检测结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性的价值[J]. 中华结核和呼吸杂志， 2017， 40(10)：755-759.
[5]翁绳凤， 李宁， 邢俊蓬， et al. Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及利福平耐药性的应用价值研究[J]. 分子诊断与治疗杂志， 2019(3)：229-232., 百拇医药(孔繁慧)