复方三白草胶囊的质量研究
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2009年7月1日
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[中图分类号]R284.2
[文献标识码]B
[文章编号]1005-0019(2009)7-0192-02
[摘要]目的:建立复方三白草胶囊的质量标准。方法:采用HPLC法对制剂主要成分三白草中斛皮素进行定量分析。对处方中其他成分虎杖、茵陈进行薄层色谱检测。结果:槲皮素在9.9-79.2μg/ml范围内呈线性。平均回收率均为101.1%,RSD为0.64%(n=5)。薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:本方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重现性好,可有效控制制剂质量。
[关键词]复方三白草胶囊;三白草;TLC;HPLC;质量标准
复方三白草胶囊为我公司研制的治疗肝炎的中药6类新药,由三白草、虎杖、茵陈等药材组成,具有清热解毒,利湿退黄的作用。药效学研究表明:(1)复方三白草胶囊三个不同剂量组对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)均有不同程度的抑制作用,有一定的量效关系;(2)复方三白草胶囊可以降低CCl4肝损伤小鼠血清SGPT值并减轻肝细胞损伤。
方中主药三白草为三白草科植物三白草Saururuschinensis(Lour.)Baill.的全草,性寒,味甘、辛。功能主治为清热利尿,解毒消肿,可用于尿路感染、肾炎水肿、肝炎等症。三白草主要含挥发油和黄酮成分。黄酮有槲皮素(quercetin)、槲皮甙(quercitrin)、异槲皮甙(Iso-quercitrin)、金丝桃甙(hyperoside)、芦丁(Rutin)、芸香甙等。现代药理研究表明三白草具有抗炎,保肝,抗氧化,降血糖,抗肿瘤的作用[1]。
为了有效的控制该药品的质量,本文采用薄层色谱法鉴别了虎杖、茵陈,HPLC法测定了主药三白草中斛皮素的含量。结果表明方法简便、特征性强、重现性好,可作为该药质量控制的依据。
1仪器和材料
1.1仪器:美国Waters系列高效液相色谱仪,KromasilODS柱(5μm,4.6×250mm),KromasilODS保护柱(5μm,4.6×10mm)。
1.2试药:槲皮素对照品购于中国药品生物制品检定所,甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,三白草、虎杖、茵陈采购于江苏省药材公司,复方三白草胶囊为我公司自制。
2方法和结果
2.1定性鉴别:虎杖[2]取本品(复方三白草胶囊)粉末01g,加甲醇10ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加25mol/L硫酸溶液5ml,加热水解30分钟,放冷,用氯仿提取2次,每次5ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为供试品溶液。取缺味(茵陈)的本品同法制得阴性样品液。另取大黄素和大黄素甲醚对照品,分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液4μl、阴性样品液4μl、对照品溶液各1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点;置氨蒸气中熏后,日光下检视,斑点变为红色。而阴性样品液无此斑点。
茵陈[3]取本品2.0g研细,加50ml乙醚,加热回溜4h,过滤,浓缩至5ml,作为样品供试品液。取缺味(茵陈)的本品同法制得阴性样品液。另取对照药材茵陈粉末5.0g,同法制得对照药材液。吸取样品供试品液、阴性样品液和对照药材液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外灯365nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点,而阴性样品液无干扰。
2.2含量测定
2.2.1色谱条件[4,5]KromasilODS柱(5μm,4.6×250mm),KromasilODS保护柱(5μm,4.6×10mm),以甲醇-0.6%磷酸溶液(52∶48)为流动相,检测波长为360nm,柱温为25℃。进样量10μl,流速为1.0ml/min。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。
2.2.2标准曲线制备:分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1ml含对照品为0495mg的溶液,作为对照品储备溶液。
分别吸取对照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.2,1.6ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。分别进样10μl,测定峰面积,以峰面积(A)为纵坐标、浓度(C,μg/ml)为横坐标,进行线性回归,得到槲皮素的回归方程和线性关系。
槲皮素A=561280C-12206.1(r=0.9996),线性范围为9.9-79.2μg/ml
2.2.3供试品溶液的制备:精密称取本品10mg,加甲醇-25%盐酸(4∶1)的混合溶液25ml,水浴加热回流30分钟,迅速冷却至室温,转移至50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
2.2.4精密度试验:取20080103批号样品,按供试品溶液的制备项下方法操作,重复5次进样,测定峰面积,结果槲皮素的RSD为0.42%。
2.2.5重复性试验:取20080103批号样品,共5份,精密称定,按供试品溶液的制备项下方法操作,测定峰面积,计算含量,结果槲皮素的RSD为1.24%。
2.2.6稳定性试验:取20080103批号样品,按供试品溶液制备及上述色谱条件,每隔2h进样1次,连续测定5次,记录峰面积,结果表明,供试品溶液在8h内稳定 ......
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