中药有效成分体内分析方法及其评价体系的研究现状
[中图分类号]R282 [文献标识码]A [文章编号]1005-0019(2009)9-0036-02
[摘要]中药及其制剂是几千年来与疾病作斗争的有力武器，服用中药及其制剂后在体内的变化规律，其药物浓度和药理作用的相互关系如何，其疗效与剂量、疗效与毒副反应的关系又如何，有待进一步深入研究，本文对近年来中药有效成分体内分析方法的研究进展做一综述。
[关键词]中药有效成分；体内分析方法；评价体系
随着药学学科的发展，药物研究从过去以化学物质研究为中心，逐渐转移到化学物质与生命科学相结合的研究。中医药要走向世界，就要求中药及其制剂必须用科学的手段来阐明。中药及其制剂不仅需要定性、定量、杂质检查等质量要求，也逐渐需要了解其在体内的信息。但其有效成分进入生物体内经代谢后其浓度均较低，因此首先遇到的和必须解决的问题是如何测定体内这些微量成分。
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在生物样品内建立、完善和提高中药及其制剂内化学成分的分析方法学是解决上述问题的实验手段和技术基础。根据血药浓度设计给药方案，以便更好地解决药物使用过程的个体差异，使临床用药趋向于更加安全、合理和有效。因此，建立科学、合理、有效的中药有效成分体内分析方法对阐明中药及其制剂的药理药效具有十分重要的意义。本文将对中药有效成分体内分析方法的研究进展做一综述。
1 主要体内分析方法
1.1 紫外一可见分光光度法：紫外一可见分光光度法操作简便、快速、准确度较高，同时由于仪器价格相对较低，因此在体内药物分析中应用广泛。但由于该方法不具备分离能力，使得其专属性在体内药物的测定中收到一些影响。
1.2 荧光分光光度法：药物及代谢物的分子结构不同，所吸收光的波长和发射的荧光波长也有所不同。利用这个特性，可以定性鉴别药物。同一种分子结构的药物及代谢物，吸收同一波长的光，则可发射出相同波长的荧光。
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1.3 气相色谱法：气相色谱法具有分离和分析两种功能的测定技术，同时具有选择性好、灵敏度高、用样量少、分析速度快和应用范围广等特点，特别适合组分比较复杂的生物样品中微量有机药物及其代谢物的分离测定。
1.4 高效液相色谱法：高效液相色谱法以经典液相色谱为基础，采用了高压送液泵、微型填料和各种高灵敏检测器，具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点。
1.5 高效毛细管电泳法：高效毛细管电泳法是经典的电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。该方法灵敏度高，高效，分离速度快，进样量只需纳升级，只需少量流动相和价格低廉的毛细管。特别适合生命科学领域中对多肽、蛋白质等的分离分析要求，因此，在体内药物分析中有着重要的应用与发展前景。
1.6 色谱一质谱联用技术：色谱一质谱联用技术可以进行这样的分析工作。色谱一质谱联用仪主要由色谱仪、接口、质谱仪、电子系统、记录系统和计算机系统六大部分组成。
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气相色谱一质谱联用(GC-MS)分析的灵敏度高，适合于低分子化合物(分子量<1000)分析，尤其适合于挥发性成分的分析。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)不仅可以避免复杂、繁琐、耗时的分离纯化工作，而且能分离鉴定以往难于辨识的痕量的药物代谢物，可以迅速、方便地应用于研究。
1.7 超高效液相色谱：超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography，UPLC)是指一种采用小颗粒填料色谱柱(粒径小于2μm)和超高压系统(压力大于105kPa)的新型液相色谱技术，能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，同时大大缩短分析周期，因此特别适用于微量复杂混合物的分离和高通量研究。
2 体内药物分析方法的评价体系
对体内药物分析方法的可行性和可靠性，需要应用若干标准来进行方法学的考察与评价。在实际工作中评价一个体内药物分析方法的优劣，一般常用精密度、准确度、灵敏度、专属性或选择性以及可测浓度范围等指标进行考察。
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2.1 准确度：准确度是考察和评价分析方法的最基本要点之一，表示测定结果与真值的符合程度。由于不可能绝对地确知样品的“真值”，因而常用回收率数值反映测定的准确程度。
2.2 精密度：精密度是指同一均质样品的测定结果与平均值的偏离程度，或者说多次测定结果彼此符合的程度，它表示分析方法的可重复性。
2.3 灵敏度：灵敏度是指一种分析方法可检出有关化合物的最小量，常用检测限和定量限来表示。
检测限是指分析方法能够从背景信号中区分出药物时，所需样品中药物的最低浓度。通常以被测信号和背景噪音比为3时的被测物的绝对量来表示。
定量限是指保证具有一定可靠性前提下，分析方法能定量测定出样品中药物的最低量。在体内药物分析中，通常以标准曲线的最低浓度点作为定量限。
, http://www.100md.com 2.4 专属性：分析方法的专属性又称选择性，通常是指样品中含有其他共存物质时，分析方法能够准确、专一地测定出药物的能力。即测得的响应值应该是属于被测物所特有的，否则就易受干扰。
2.5 线性范围：线性范围是指一种分析方法的精密度、准确度都符合要求的试验结果成线性时供试物浓度的变化范围。标准曲线的线性程度目前仍广泛采用相关系数(r)表示。标准曲线应该覆盖样品可能的浓度范围。
2.6 稳定性：稳定性是指药物的稳定性，是贮存条件、药物的化学性质、空白生物样品和容器系统的函数。药物在生物样品中的稳定性包括：在室温条件下的稳定性要超过在冷冻条件下的稳定性；反复冷冻一解冻条件下的稳定性的考察。
2.7 方法的相关性：对同一种样品，用已证明有相当专属性的分析方法与新建立的分析方法同时进行测定，然后比较两种分析方法测得结果的相关程度。
, 百拇医药 对体内药物分析方法的考察还应从分析方法的可重复性、耐用性、操作的难易、每个样品测定耗费时间、仪器设备要求及成本费用多少等方面进行综合评价。
3 结语
中药有效成分体内分析方法及其评价体系的建立，为阐明中药有效成分体内代谢过程和中药发挥药效的物质基础提供了有力的工具。通过对中药有效成分的体内分析，确立中药及其复方制剂的科学，使中药及其制剂从总体水平上向科学化和规模化前进。
参考文献
[1]魏璐雪，杜树山，中药及其制剂体内分析研究必要性的思考，北京中医药大学学报，1999，22(3)：52
[2]张君仁，臧恒昌，主编，体内药物分析，北京，化学工业出版社，2002
[3]吕春艳，张兰桐，液-质联用技术在中药与天然产物代谢研究中的应用，中国药学杂志，2006，41(4)：241-244
[4]艾华，王广基等，超高效液相色谱在现代药代动力学中的应用，中国药科大学学报，2007，38(4)：294-298, http://www.100md.com
[摘要]中药及其制剂是几千年来与疾病作斗争的有力武器，服用中药及其制剂后在体内的变化规律，其药物浓度和药理作用的相互关系如何，其疗效与剂量、疗效与毒副反应的关系又如何，有待进一步深入研究，本文对近年来中药有效成分体内分析方法的研究进展做一综述。
[关键词]中药有效成分；体内分析方法；评价体系
随着药学学科的发展，药物研究从过去以化学物质研究为中心，逐渐转移到化学物质与生命科学相结合的研究。中医药要走向世界，就要求中药及其制剂必须用科学的手段来阐明。中药及其制剂不仅需要定性、定量、杂质检查等质量要求，也逐渐需要了解其在体内的信息。但其有效成分进入生物体内经代谢后其浓度均较低，因此首先遇到的和必须解决的问题是如何测定体内这些微量成分。
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在生物样品内建立、完善和提高中药及其制剂内化学成分的分析方法学是解决上述问题的实验手段和技术基础。根据血药浓度设计给药方案，以便更好地解决药物使用过程的个体差异，使临床用药趋向于更加安全、合理和有效。因此，建立科学、合理、有效的中药有效成分体内分析方法对阐明中药及其制剂的药理药效具有十分重要的意义。本文将对中药有效成分体内分析方法的研究进展做一综述。
1 主要体内分析方法
1.1 紫外一可见分光光度法：紫外一可见分光光度法操作简便、快速、准确度较高，同时由于仪器价格相对较低，因此在体内药物分析中应用广泛。但由于该方法不具备分离能力，使得其专属性在体内药物的测定中收到一些影响。
1.2 荧光分光光度法：药物及代谢物的分子结构不同，所吸收光的波长和发射的荧光波长也有所不同。利用这个特性，可以定性鉴别药物。同一种分子结构的药物及代谢物，吸收同一波长的光，则可发射出相同波长的荧光。
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1.3 气相色谱法：气相色谱法具有分离和分析两种功能的测定技术，同时具有选择性好、灵敏度高、用样量少、分析速度快和应用范围广等特点，特别适合组分比较复杂的生物样品中微量有机药物及其代谢物的分离测定。
1.4 高效液相色谱法：高效液相色谱法以经典液相色谱为基础，采用了高压送液泵、微型填料和各种高灵敏检测器，具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点。
1.5 高效毛细管电泳法：高效毛细管电泳法是经典的电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。该方法灵敏度高，高效，分离速度快，进样量只需纳升级，只需少量流动相和价格低廉的毛细管。特别适合生命科学领域中对多肽、蛋白质等的分离分析要求，因此，在体内药物分析中有着重要的应用与发展前景。
1.6 色谱一质谱联用技术：色谱一质谱联用技术可以进行这样的分析工作。色谱一质谱联用仪主要由色谱仪、接口、质谱仪、电子系统、记录系统和计算机系统六大部分组成。
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气相色谱一质谱联用(GC-MS)分析的灵敏度高，适合于低分子化合物(分子量<1000)分析，尤其适合于挥发性成分的分析。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)不仅可以避免复杂、繁琐、耗时的分离纯化工作，而且能分离鉴定以往难于辨识的痕量的药物代谢物，可以迅速、方便地应用于研究。
1.7 超高效液相色谱：超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography，UPLC)是指一种采用小颗粒填料色谱柱(粒径小于2μm)和超高压系统(压力大于105kPa)的新型液相色谱技术，能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，同时大大缩短分析周期，因此特别适用于微量复杂混合物的分离和高通量研究。
2 体内药物分析方法的评价体系
对体内药物分析方法的可行性和可靠性，需要应用若干标准来进行方法学的考察与评价。在实际工作中评价一个体内药物分析方法的优劣，一般常用精密度、准确度、灵敏度、专属性或选择性以及可测浓度范围等指标进行考察。
, 百拇医药
2.1 准确度：准确度是考察和评价分析方法的最基本要点之一，表示测定结果与真值的符合程度。由于不可能绝对地确知样品的“真值”，因而常用回收率数值反映测定的准确程度。
2.2 精密度：精密度是指同一均质样品的测定结果与平均值的偏离程度，或者说多次测定结果彼此符合的程度，它表示分析方法的可重复性。
2.3 灵敏度：灵敏度是指一种分析方法可检出有关化合物的最小量，常用检测限和定量限来表示。
检测限是指分析方法能够从背景信号中区分出药物时，所需样品中药物的最低浓度。通常以被测信号和背景噪音比为3时的被测物的绝对量来表示。
定量限是指保证具有一定可靠性前提下，分析方法能定量测定出样品中药物的最低量。在体内药物分析中，通常以标准曲线的最低浓度点作为定量限。
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2.5 线性范围：线性范围是指一种分析方法的精密度、准确度都符合要求的试验结果成线性时供试物浓度的变化范围。标准曲线的线性程度目前仍广泛采用相关系数(r)表示。标准曲线应该覆盖样品可能的浓度范围。
2.6 稳定性：稳定性是指药物的稳定性，是贮存条件、药物的化学性质、空白生物样品和容器系统的函数。药物在生物样品中的稳定性包括：在室温条件下的稳定性要超过在冷冻条件下的稳定性；反复冷冻一解冻条件下的稳定性的考察。
2.7 方法的相关性：对同一种样品，用已证明有相当专属性的分析方法与新建立的分析方法同时进行测定，然后比较两种分析方法测得结果的相关程度。
, 百拇医药 对体内药物分析方法的考察还应从分析方法的可重复性、耐用性、操作的难易、每个样品测定耗费时间、仪器设备要求及成本费用多少等方面进行综合评价。
3 结语
中药有效成分体内分析方法及其评价体系的建立，为阐明中药有效成分体内代谢过程和中药发挥药效的物质基础提供了有力的工具。通过对中药有效成分的体内分析，确立中药及其复方制剂的科学，使中药及其制剂从总体水平上向科学化和规模化前进。
参考文献
[1]魏璐雪，杜树山，中药及其制剂体内分析研究必要性的思考，北京中医药大学学报，1999，22(3)：52
[2]张君仁，臧恒昌，主编，体内药物分析，北京，化学工业出版社，2002
[3]吕春艳，张兰桐，液-质联用技术在中药与天然产物代谢研究中的应用，中国药学杂志，2006，41(4)：241-244
[4]艾华，王广基等，超高效液相色谱在现代药代动力学中的应用，中国药科大学学报，2007，38(4)：294-298, http://www.100md.com