IL-2与抗人膀胱癌/抗CD3双功能抗体协同的细胞毒性作用研究(1)
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2010年8月1日
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【摘要】目的探索膀胱移行细胞癌治疗的新方法。方法制备抗人膀胱癌/抗CD3双功能抗体,测定其与IL-2协同增强LAK细胞对膀胱癌细胞的细胞毒性,以CD3单抗、膀胱癌单抗、二种单抗混合物及RPMI-1640作对照。结果双功能抗体与单抗相比,能显著提高LAK细胞对膀胱癌细胞的杀伤作用;双抗加入IL-2后,LAK细胞毒性得到显著的提高,IL-2也能增强CD3单抗和膀胱癌单抗的细胞毒性。结论抗人膀胱癌/抗CD3双功能抗体与IL-2协同可显著提高LAK细胞对膀胱癌细胞的细胞毒作用。
【关键词】双功能抗体IL-2膀胱癌LAK细胞
中国图分类号:R737.14文献标识码:A 文章编号:1005-0515(2010)08-064-02
Study on cooperative action of bispecific antibody(anti-human bladder
cancer/anti-CD3) and IL-2 on cytotoxicity of LAK cells
【Abstract】ObjectiveTo study a new method for improving therapeutic effect on human bladder carcinoma. MethodsCytotoxicity of LAK cells against bladder cancer cells enhanced by bispecific antibody(anti-human bladder cancer/anti-CD3) and IL-2 was examined,comparing with control groups. ResultsCytotoxicity of LAK cells against bladder carcinoma cells could be markedly enhanced by bispecific antibody compared with anti-CD3 and anti-human bladder cancer monoclonal antibody.When LAK cells incubating with IL-2,its cytotoxicity enhanced by bispecific antibody was higher. ConclusionBispecific antibody and IL-2 could markedly enhance cytotoxicity of LAK cells against bladder cancer cells.
【Key Words】Bispecific antibodyInterleukin-2;Bladdercancer;Lymphokineactivated killer cells
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,以美国为例,2002年有56500例新诊病例[1]。目前以双功能抗体(Bispecific antibody,BsAb)为代表的主动免疫生物治疗,被称为肿瘤治疗的第四模式,是近年来较有希望的一种特异性免疫疗法[2]。抗人膀胱癌/抗CD3双功能抗体能同时识别T淋巴细胞亚群上CD3分子和膀胱移行细胞癌(以下简称:膀胱癌)细胞膜表面相关抗原的抗体,它既能激活T淋巴细胞及增强其细胞毒活性,又有特异性地将活化的T淋巴细胞引导至膀胱癌细胞,并产生细胞毒作用。IL-2是LAK细胞所必需的细胞因子,具有增强LAK细胞,激活其细胞毒性的作用[3]。本实验对IL-2在抗人膀胱癌/抗CD3双功能抗体的细胞毒性中的作用进行了研究。
1..材料与方法
1.1材料
抗人膀胱癌的单克隆抗体腹水,吉林大学第二医院馈赠。抗CD3的单克隆抗体腹水,由吉林大学基础医学院免疫教研室提供。按辛酸-硫酸胺法纯化,参照Nitta的方法[5]。
取已纯化的抗人膀胱癌的单抗,放柠檬酸缓冲液中透析过夜,按酶:单抗=1:4(w/w)加入胃蛋白酶作用18小时,滴加1mol/L的NaHCO3使反应物pH值为8.0,终止酶反应。Sephadex G-150凝胶柱层析,核酸蛋白仪280nm波长监测蛋白峰,收集器分段收集抗体的F(ab`)2片段后,聚乙二醇适当浓缩。CD3单抗F(ab`)2片段的制备同上。
取抗人膀胱癌的单抗的F(ab`)2片段,加入终浓度为0.5mmol/L的二硫苏糖醇(DTT,购自Sigma),37℃作用30分钟。Sephadex G-25凝胶柱层析,225nm监测并分段收集Fab`片段,适当浓缩。同样方法收集CD3单抗Fab`片段。
取CD3单抗Fab`片段,加入终浓度为0.5mmol/L的双功能偶联剂5,5`-二硫代-双2硝基苯酸(DTNB,购自Sigma),37℃作用30分钟后Sephadex G-25凝胶柱层析,225nm监测,并分段收集CD3单抗Fab`片段与DTNB反应所得的Fab`-NB片段。将抗人膀胱癌的单抗的Fab`和CD3单抗Fab`-NB片段按1:1混合,37℃反应4小时,反应物用Sephadex G-150凝胶柱层析,280nm监测,分段收集杂合的F(ab`)2片段,测定双抗浓度后,置-20℃冰箱保存 ......
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