免疫分型对过氧化物酶阴性急性白血病的诊断价值
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2010年8月1日
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【摘要】目的评价免疫分型对过氧化物酶(POX)阴性急性白血病(AL)的诊断价值方法应用以形态学及组织化学为主的FAB分型和流式细胞仪免疫分型分别对46例POX阴性的AL进行诊断结果46例中,37例形态学分型与免疫分型符合,符合率80.4%;5例形态学分型与免疫分型不符,其中形态学诊断为恶性组织细胞白血病(MH)1例经免疫分型纠正为B淋巴细胞急性白血病(B-ALL),形态学诊断为ALL-L24例经免疫分型确诊为M02例、、M52例。;形态学难以确诊4例经免疫分型确诊为B-ALL1例、B/T-ALL1例、M01例、MAL1例。结论免疫分型在POX阴性AL的准确诊断中具有重要价值,是FAB分型的重要补充。
【关键词】免疫分型急性白血病过氧化物酶形态学流式细胞术诊断
中国图分类号:R466.11 文献标识码:B 文章编号:1005-0515(2010)08-072-023
AL是一种血液系统的恶性肿瘤,长期以来临床上多根据骨髓细胞形态和组织化学染色对其进行FAB分型诊断,该分型模式对于白血病的诊断和治疗发挥了巨大作用,但是随着免疫分型在白血病诊断中的应用,我们发现单纯依靠细胞形态和组织化学染色对于AL的诊断,尤其是对于对于过氧化物酶阴性AL的诊断具有局限性,失误率不可忽视,现报道如下:
1资料与方法
1.1病例来源
2006年10月~2009年9月在我院血液科初诊为AL且POX阴性的患者46例,其中男26例,年龄1～73(33.04±21.7)岁,女20例,年龄1～74(29.8±20.5)岁。
1.2 标本准备 取骨髓或外周血2 ml,肝素或EDTA抗凝。根据骨髓增生程度及外周血白细胞数,部分样本用生理盐水稀释至细胞数(1～10)×10 /L备用。
1.3仪器与试剂
FACSCan型流式细胞仪。单克隆抗体包括CD2、CD3、CD4、CD7、CD10、CD13、CD14、CD19、CD20、MPO、HLA-DR。流式细胞仪及所有单抗均购自美国B—D公司。POX染色试剂由上海太阳公司提供。
1.4实验方法
取患者肝素抗凝骨髓液或静脉血1～2 ml,每管加入骨髓或外周血50ul及3种荧光标记抗体各20ul, 4℃反应2O～30 min,再加入2 ml红细胞溶解液,震荡后置室温10 min,用生理盐水洗涤1次,加入0.5 ml生理盐水待检。
1.5流式细胞术分析
FACSCan型流式细胞仪,488nm激发光源。测定前以标准校正荧光微球校正仪器,应用CELL.QUEST软件,每管获取并分析10 000个细胞。用CD45/SSC设门分析R2内细胞,根据细胞CD45的抗原表达及细胞颗粒表达程度将细胞分为红细胞和碎片群,单核细胞群、粒细胞群、淋巴细胞群、不成熟淋巴细胞群和不成熟髓细胞群。结果判断以白血病细胞表面抗原表达≥20% 以上为阳性。AML和ALL免疫分型的标准参照参考文献[1]。
1.6POX染色操作步骤 按说明书,POX>3%为阳性,<3%为阴性。
2结果
2.1根据形态学和POX染色,按FAB标准进行分型
46例POX染色均为阴性。形态学分型为M51例,ALL-L114例,ALL-L223例,ALL-L33例,MH1例,难以诊断4例。
2.2免疫分型
经流式细胞仪免疫分型纠正诊断为AML7例(其中M03例、M54例),ALL39例(其中B-ALL30例,T-ALL6例,B/T-ALL2例,BAL1例)。46例POX阴性的AL中,37例形态学分型与免疫分型符合,符合率80.4%;5例不符合,其中形态学诊断为MH1例经免疫分型纠正为B-ALL;形态学诊断为ALL-L24例经免疫分型确诊为M02例、M52例。;形态学难以诊断的4例经免疫分型确诊为M01例、M51例、B/T-ALL1例、MAL1例。
1例、BAL1例。46例POX阴性AL形态学与免疫分型结果见下表。
3..讨论
目前国内中等城市及基层医院对白血病诊断与分型的主要依据是骨髓细胞学形态学检查及以POX为主的细胞化学染色。其操作简便、不需要大型仪器。然而单纯依据形态学与POX染色结果对AL进行ALL与ANLL分型有其局限性:原始单核细胞POX染色既可以为弱阳性,也可为阴性,故POX阴性标本要防止将M5误诊为ALL;M0为急性微分化AML,形态学上呈原始细胞特征,类似ALL-L2型,POX染色<3%,仅仅依据形态学与化学染色不能将之与ALL区分开来;对于形态不典型的复杂白血病仅仅依靠经验难以判断类型。流式细胞免疫分型是应用单克隆抗体荧光标记技术对各种细胞内外的特异性抗原进行精细的检测和判定,具有高度的特异性、敏感性和稳定性,因而提高白血病分型的准确性,弥补形态学分型的不足。
本组46例POX阴性AL有2例误诊为ALL的M5、2例误诊为ALL的M0依据免疫分型结合形态学得以纠正,4例形态学及化学染色难以确诊的疑难病例也结合免疫分型确诊为M01例、M5 1例、B/T-ALL1例、MAL1例 ......
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