两种粪便隐血试验方法的比较
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【摘要】目的 探讨胶体金法和邻联甲苯胺法在粪便隐血试验中的应用。方法 所有粪便标本分别用两种方法同时检测，严格按照试剂盒说明书操作。结果 以邻联甲苯胺法进行粪便隐血测定时易引起假阳性。胶体金法隐血试验常导致假阴性。结论 以邻联甲苯胺法进行粪便隐血测定时，应在试验3天前，禁食影响试验的动物肉类、生鲜蔬菜和暂停服用有关药物，防止过高的假阳性率出现。当患者的粪便外观已呈现鲜红色或柏油样状黑色，必须怀疑胶体金法的阴性结果是因为钩状效应而产生的假阴性结果，应减少标本投入量或适当稀释后再测，以提高检出率。
【关键词】粪便隐血试验 胶体金法 邻联甲苯胺法 假阴性 假阳性
中图分类号：R446.133 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2010)11-399-02
粪便隐血试验(OBT)是指用化学或免疫学的方法证实粪便中微量血液的试验，对消化道出血的诊断及消化道恶性肿瘤的筛检具有重要的参考价值。阳性见于消化道疾病如溃疡、药物(如阿司匹林、糖皮质激素、吲哚美辛)、肠结核、克罗恩(Crohn)病、溃疡性结肠炎、钩虫病、结肠息肉、消化道肿瘤(如胃癌、结肠癌)。隐血试验阴性是判断出血完全停止的可靠指标。目前常用的方法大致有两种，即免疫法和化学法。我院从2009年6月开始应用胶体金试纸测定隐血[1]并取得了较满意的结果，同时发现对某些特殊标本用胶体金法检测，其结果与临床不符。因此，我们对胶体金法和邻联甲苯胺法进行临床结果比较，现报告如下：
1 材料与方法
1.1 标本 100例我院消化内科门诊就诊者粪便及50例临床确诊为上消化道出血患者的柏油样粪便。
1.2 试剂 胶体金法用北京万华普曼公司消康保隐血试纸(批号：20090612)。邻联甲苯胺法用珠海贝索公司的BaSo Fecal OB-Ⅱ试剂(批号：090516)。
1.3 操作方法 所有粪便标本分别用两种方法同时检测，严格按照试剂盒说明书操作，其中邻联甲苯胺法测定为阳性而胶体金法为阴性的标本进行1：50，1：100，1：200，1：400稀释后用胶体金法再测。
1.4 结果判定 胶体金法：在5分钟内观察结果，如果测试线和对照线都出现紫红色是为阳性；如果对照线出现紫红色，测试线不显色时为阴性；如果测试线和对照线都不出现紫红色，或只在测试线出现一紫红色，则表示试纸已失效。邻联甲苯胺法：在方格内滴1滴显色剂A，待试剂完全渗透后，再滴1滴显色剂B，于5分钟内判读完毕。当加入B试剂后，立即产生深紫蓝色，报告为(4+)；逐渐产生深紫蓝色，报告为(3+)；逐渐产生紫蓝色，报告为(2+)；1分钟之内产生淡紫色，报告为(+)；1分钟之后才产生淡紫色，报告为(±)；于5分钟之内无任何颜色反应，报告为(-)。
2结果
以胶体金法测定阳性为标准，两种方法结果比较见表1、表2。
表1 门诊患者两法阳性结果比较
a首检邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的6例标本稀释后，检出阳性4例，合计47例；b其中2例为假阳性。
表2 50例上消化道出血患者两法阳性结果比较
c首检邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的20例标本稀释后，检出阳性18例，合计48例。
3 讨论
邻联甲苯胺法隐血试验是利用血红蛋白中含铁血红素具有过氧化物酶(POX)的活性，能分解过氧化物、催化色原物质氧化呈色。呈色的深浅反映了血红蛋白含量，即出血量的多少。具有灵敏度好，测定范围广的特点，其灵敏度可达0.2～1.0mg/L，为1983年中华医学会全国临床检验方法学学术讨论会推荐的方法[2]。但如果粪便中富含过氧化物酶类非血红蛋白和血红素类物质，或铁剂、阿司匹林等药物也可引起假阳性。因此以邻联甲苯胺法进行粪便隐血测定时，应在试验3天前，禁食影响试验的动物肉类、生鲜蔬菜和暂停服用有关药物，防止过高的假阳性率出现。
胶体金法隐血试验是利用金标Hb抗体与Hb结合后，向上扩散分别与测试区的抗Hb(夹心法)及对照区的Hb结合，此时胶体金颗粒聚集呈颜色反应，具有较高灵敏度、高特异性的特点。但上消化道出血患者，Hb经过胃、胰、肠等器官不同消化液及肠道细菌蛋白酶的作用而随粪便排出体外，期间Hb易变性或消失，故常导致假阴性。此外大量出血时，抗原Hb浓度过高(文献报道高于每克粪便700ug)，Hb和Hb-Hb抗体复合物与测试区的抗Hb发生竞争性结合，抑制了胶体金颗粒聚集(即所谓的后带现象)，导致假阴性，约40%～50%的上消化道出血患者胶体金法不能检出。本试验结果也显示了这一点，在50例上消化道出血患者标本中首次检出率只有60.0% ......
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