治疗老年痴呆主要药效评价指标及其方法的研究进展(2)
2.1 胆碱酯酶(AchE)活性的检测胆碱酯酶是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶直接参与自主神经功能调节、肌肉运动、大脑思维记忆等重要功能。研究证实老年痴呆患者中枢胆碱能系统损伤,AchE活性和突触前胆碱能标志在多处脑区均显著降低或缺失患者基底前脑区胆碱能神经元丢失,从基底节到皮质,胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性降低和乙酰胆碱酯酶(AChE)活性明显升高,造成乙酰胆碱 (ACh)的合成、储存和释放减少,皮质 ACh受体数目减少,产生痴呆症状 [5]。总的来说,老年痴呆患者脑组织中胆碱乙酰化酶活性明显降低,胆碱酯酶活性显著升高,造成 ACh含量不足,导致中枢神经系统功能障碍,出现学习记忆及认知功能下降,甚至智力丧失[6]。因此AchE活性的检测作为评价老年痴呆药效的主要指标,且在药效评价中的使用甚为频繁。
检测方法:断头法处死实验动物后,迅速取脑,用预冷的生理盐水冲净表面血液,用滤纸吸干,去除软脑膜血管。取右脑称重,置微型匀浆器中,加无水乙醇研磨,再加生理盐水充分研磨制成匀浆。冷冻离心机离心,取上清液。用羟胺比色法测定AChE活性(可按照试剂盒说明书进行操作)。
2.2 谷氨酸含量的测定
谷氨酸是脑内主要的兴奋性神经递质,介导兴奋性突触传递,并与长时程增强(long term potentiation LTP)的形成密切相关 [7],也作为老年痴呆药效的相关评价之一。
检测方法:在海马组织中加入HCL溶液,冰浴下超声匀浆 ......
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