补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经功能及BrdU的影响(2)
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1.2.6统计学分析 所有数据以均数加减标准差(x±s)表示，应用SPSS 14.0统计软件对数据进行统计分析，组间比较用单因素方差分析，P<0.05被认为有统计学意义。
2 结果
2.1 补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响
见表1。正常组和苏醒2h后假手术组动物未见神经功能缺损，造模后各手术组动物都存在有明显神经功能缺损，提示造模成功，但神经功能评分差异无统计学意义。随着存活时间延长，各组动物积分逐步减少，提示动物存在一定的自我恢复能力。用药7、14d，补阳还五汤组降低神经功能积分作用与其它用药组比较差异有统计学意义(p<0.05)。
表1 补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响(x±s)
注：与同期各组比较*P<0.05。
2.2 补阳还五汤对脑缺血后BrdU的影响
见表2，图1。免疫组化结果显示的BrdU阳性细胞内呈棕红色深染，为细胞核染色，形态多样，胞核多为实性，呈圆形、椭圆形、梭形或不规则形，甚至有部分融合成团。正常组可见少量BrdU阳性细胞散在分布于各脑区，但数量少且排列比较稀疏。脑缺血后即可见BrdU阳性细胞增加，主要集中在梗死周围区、室旁区、皮质或脉络膜，排列不规整，胞体形状不一，7天时达高峰，而且排列紧密，然后逐渐下降，14天仍高于正常。补阳还五汤组细胞增殖规律与模型组一致，7d、14d时补阳还五汤组在阳性细胞数目上与同期各组比较具有显著性差异(P<0.05)。提示补阳还五汤可以促进脑缺血后BrdU的表达。
图1 各组脑内BrdU+细胞表达(×200)
A正常组 B假手术组 C模型组 D补阳还五汤组
3 讨论
脑缺血后，由于得不到血液的营养，缺血区域的神经、血管等组织相继坏死，血液无法正常到达该区，造成该缺血区大脑所支配的功能受限。这时促进缺血区域血管新生，重建血液循环，供给大脑充足的血氧，恢复其神经功能和相应的感觉及运动神经元，就是亟待解决的问题。
BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)是一种胸腺嘧啶脱氧核苷相似物，在细胞有丝分裂S期进入细胞单链，并被嵌入新合成的DNA中，故可用于有丝分裂标记，从而了解细胞的增殖状况。经免疫组化染色BrdU+细胞胞浆呈棕红色，胞核呈紫褐色。Cai等[4]用标记BrdU的方法来追踪脑缺血后祖细胞的扩散，发现补阳还五汤可以促进缺血脑组织海马及脑室下区(SVZ)祖细胞的增殖，改善短暂局灶性脑缺血大鼠脑组织神经功能，减少梗死体积，刺激神经的增殖和调节VEGF及其受体flk1表达。
补阳还五汤是临床治疗缺血性脑中风的常用方剂，本研究初步证实：补阳还五汤可促进局灶性脑缺血大鼠缺血区BrdU的表达。本实验通过标记BrdU阳性细胞证实，补阳还五汤可以有效促进内皮细胞的增殖，其机理可能是补阳还五汤能有效恢复血管内皮细胞有丝分裂生长因子信号的传导，改善细胞外环境，说明补阳还五汤不仅有直接保护内皮细胞的作用，而且还可以通过改善细胞外环境的作用来间接保持内皮细胞的完整，并使其最终形成新的血管。国内其它研究也证实补阳还五汤可以通过调控促血管生成素-1及其受体的表达，来促进脑出血大鼠血肿吸收，改善脑组织循环，对血管的重建起到一定的作用[5]。本研究在上述研究成果的基础上得出补阳还五汤促血管新生的途径之一便是通过调控BrdU的表达来实现的。
参考文献
[1] 刘柏炎，蔡光先，等.补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响[J].中草药，2007，38(3)：394-397.
[2] 刘柏炎，蔡光先，等.补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞影响的初步研究[J].中国临床康复，2004，8(22)：4532-4533.
[3] Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20(1)：84-91.
[4] Cai G ......
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