慢性应激对wistar大鼠牙周组织的影响
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【摘要】目的 研究并探讨慢性应激与牙周病的关系。方法 建立大鼠牙周炎模型,并对大鼠进行游泳应激；测量大鼠的平均体重；用免疫组化技术，对细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule -1，ICAM-1)在大鼠牙周组织中的表达进行分析。结果 单纯应激组(A组)与结扎+应激组(B组)的体重明显低于结扎组(C组)和对照组(D组)。A组与B组、C组与D组没有差别。应激+结扎组(B组)与结扎组(C组)的ICAM-1阳性细胞百分数明显高于单纯应激组(A组)与对照组(D组)。B组与C组、A组与D组没有差别。p<0.05结论 慢性应激是牙周病发生的重要的促进因素之一，但是单纯的应激不足以引起牙周病的发生。
【关键词】应激 牙周病 细胞粘附分子
中图分类号：R781.42文献标识码：A文章编号：1005-0515(2011)1-038-02
传统的医学模式向现代生物-心理-社会模式转变的过程中，人们逐渐地意识到长期的心理应激在牙周病的发生发展中的重要性，是牙周病的一个危险因素[1、2]。细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule，ICAM-1)是细胞粘附分子免疫球蛋白超家族，可以判断牙周炎症程度的一项客观指标[3]。主要参与炎症反应和免疫调节[4]。定量检测ICAM-1的水平可以客观的判断牙周组织的炎症程度。本次实验拟在建立一种简便、经济，能够模拟慢性应激状态下的实验动物模型，探讨慢性应激与牙周病发生、发展的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 20只健康雄性成年Wistar大鼠(山西医科大学)，年龄6周，平均体重146.73g。
1.1.2 实验材料 10%的水合氯醛，10%的甲醛，0000的尼龙丝线，EDTA脱钙液，兔抗鼠ICAM-1单克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，兔Streptavidin-HRP试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)，DAB显色剂(山西医科大学)，切片机(中国上海)，光学显微镜(olympus)。
1.2 方法
1.2.1 20只大鼠随机分成A、B、C、D四组，分别是应激组、结扎+应激组、结扎组、对照组。每组五只。每只大鼠按0.35mg/100mg腹腔注射10%水合氯醛。全麻后，使用0000的尼龙丝线结扎B、C组大鼠下颌左侧切牙，为防止丝线滑脱，在大鼠牙龈处缝线结扎；在温度为37℃的水浴内对A、B组大鼠进行游泳应激，第一天应激五分钟，以后每天增加一分钟，持续八周；D组组作为对照组，不做应激和结扎。
1.2.2 按啮齿类动物标准饲料喂养，自由摄食、饮水。八周后测量每只大鼠的体重，然后处死动物。截取下颌骨，置于10%甲醛溶液中72小时，EDTA脱钙液中脱钙3-4周。脱水，常温下石蜡包埋。垂直于牙长轴方向6μm做切片，常温下行ICAM-1单克隆抗体组化染色，中性树脂封片。光镜下每张切片选取5个区域，在400×的视野下计数ICAM-1阳性细胞数。
1.3统计学分析 所得数据采用spss11.0统计软件处理，采用t检验比较每两组大鼠的平均体重和ICAM-1阳性细胞百分数的差异。
2 结果
实验结束A组与B组的体重明显低于C组和D组。A组与B组、C组与D组的体重没有明显差别。(p<0.05)免疫组化染色结果显示，切片中棕褐色的细胞为ICAM-1阳性细胞(图1)，B组与C组ICAM-1阳性细胞百分数明显高于A组与D组。B组与C组、A组与D组没有统计学上的差别。(p<0.05)见表1
表1
(p<0.05)
图1
3 讨论
在1989年，由Loker创建了应激-疾病模式[5]，由于心理压力的应激，神经系统和神经内分泌系统释放细胞因子，影响免疫系统的活动[6]和免疫系统的调节，使机体的易感性增加，患牙周病的几率加大。本次实验中A组与B组的体重明显低于C组和D组，表明A,B两组的大鼠处于应激状态中，其神经内分泌系统对应激进行了调节，并且B,C两组牙周组织中ICAM-1表达明显高于A组和D组。但是B组与C组、A组与D组牙周中ICAM-1的表达没有统计学上的差别。说明单纯的长期应激是不会引起牙周病发生的。但是，仅有牙周微生物的存在并不必然导致牙周病的发生[7]。在牙周生态系中，牙周菌群不是稳定不变的，各种微生物菌群的消长和波动是受各种因素影响的[8]。随着外部环境因素的不断变化，机体产生应激，如果长时间的应激超过机体的耐受程度，牙周生态系统的平衡便被打乱。微生物作为牙周病的始动因子便引起机体免疫系统的活动，引起宿主免疫应答，造成牙周组织的损害[8、9]，形成牙周病。
牙周病是以牙周微生物为始动因子，多种因素参与的一个复杂疾病[8、10]。慢性应激只是口腔微生物菌群与机体免疫系统之间平衡的一个破坏因素。但是，在分子水平上应激对牙周病的作用机制有待进一步研究。
参考文献
[1]Solic AC Lotufo RF,Pannuti CM,et al.Association of periodontal disease to anxiety and depression symptoms,and psychosocial stress factors [J].J Clin Periodontal ,2004
[2]Dolic M,Bailer J,Staehle HJ,et al ......
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