某市市售番茄转基因成份检测
 |
| 第1页 |
参见附件(3673KB，3页)。
【摘要】 目的 检测某市售番茄转基因成分。方法 采用CTAB法提取样品的基因组DNA，分别设计启动子CaMV 35s(promoter from canliflomer mosaic virus，花椰菜花叶病毒35s启动子)和终止子NOS(nopaline synthase lerminator，胭脂碱合成酶3’转录终止子)作为特异性引物，然后对基因组DNA进行PCR扩增检测，根据扩增后产物的琼脂糖凝胶电泳图可分析出其中是否含有转基因成分。结果 10份番茄样品中10份检测出含有转基因成份，占检测样品的100%。结论 随着转基因作物的出现，其安全性也随之被人们所关注。究竟转基因作物是否对人体和环境有害目前还没有定论，各国政府也均针对转基因作物加强了监管工作，以防止其发生潜在的危害。
【关键词】转基因食品 转基因检测 DNA提取 番茄
中图分类号：S513 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)5-041-03
由于转基因食品的安全性目前还没有得出明确的结论，其是否对环境和人体有害也是未知的，故转基因产品的存在也有一定的风险性[1]。这份实验研究结果将对消费者了解日常生活中转基因食品种类和比例有所帮助，让人们享有一个知情权，自主地选择是否接受转基因产品。
1 材料和方法
1.1 材料
从某市各个市场及超市随机购买番茄。
液氮、研钵、1.5ml EP管、恒温水浴锅、离心机、电泳仪、微波炉、凝胶成像系统、PCR扩增仪、高压灭菌锅等。1mol/L Tris-HCl(PH8.0)、0.5M EDTA(PH 8.0)、CTAB提取液、3mol/L醋酸钠(PH 5.6)
1.2 方法
1.2.1 基因组DNA的提取
参考文献[2] 提取基因组DNA。
1.2.2 电泳检测
将提取出来的10组DNA产物进行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统观察、照相、记录。检测其是否为DNA以及其纯度如何。
1.2.3 对提取产物的PCR检测[3-4]
1.2.3.1 设计引物
18S：18S rDNA
CaMV 35s：promoter from canliflomer mosaic virus，花椰菜花叶病毒35S启动子
NOS：nopaline synthase lerminator，胭脂碱合成酶3’转录终止子
1.2.3.2PCR反应体系
按照W izard PCR prepsDNAPurification System试剂盒要求进行PCR反应。
2 结果
2.1 DNA电泳图
从图中(图1-1)可见1-10号样品均成功提取出基因组DNA。
图1-1 番茄基因组DNA电泳图
2.2 PCR检测
2.2.1 内标的检测
分别对番茄样品DNA用18S rDNA引物进行PCR扩增，如果出现预期大小的条带，则说明提取出的基因组DNA能够经过PCR扩增得出特定序列，可进一步用于外源基因检测并进行转基因成分的判定；如果没有出现预期大小的条带，则重复DNA提取，直到扩增出目标条带。本实验分别对番茄样品DNA用18S rDNA引物进行PCR扩增后，均扩增出特异条带且大小与理论值相符，扩增结果如图1-2。
图1-2 番茄18s引物PCR扩增电泳图
2.2.2 外源基因的检测
对提取出的番茄样品基因组DNA设计适当的引物进行PCR测试，如果待测样品PCR扩增产物的电泳图中出现预期大小的电泳条带，则可初步判定待测样品中含有可疑的外源基因；如果电泳图中未出现预期大小的电泳条带，则可断定待测样品中不含有该外源基因。
下图为番茄NOS扩增图片(图1-3)，图中可见1-10号样品均出现了预期的200bp左右的目标条带，与理论的180bp相符，可判定1-10号样品均含有转基因成分。
图1-3 番茄NOS引物PCR扩增电泳图
下图为番茄35S扩增图片(图1-4)，图中可见1-10号样品均出现了预期的200bp左右的目标条带，与理论的195bp相符，可判定其均含有转基因成分。
图1-4 番茄35s引物PCR扩增电泳图
3 结论
观察外源基因扩增电泳图，可发现：番茄NOS和35s电泳图中，10个样品均出现了180bp和195bp大小的目标条带，表明其中均含有NOS和CaMV 35s基因，可判定本次试验所检测的十组番茄均含有转基因成分。因此可大致认定现某市市场上销售的番茄均为转基因番茄(由于受取材时间和地点的影响，本实验结果仅供参考)。
4 讨论
一般而言、对某种物质安全性检测的指标主要包括急、慢性毒性，遗传毒性，致癌，致畸，致突变性等。转基因食品由于在生产设计中是针对食品品质改造或增加已知健康作用的成分，一般来说，安全问题不会太突出。这与从自然条件下经杂交所获得之动植物新品种作为新型食品不存在安全问题的道理是一样的 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3673KB，3页)。