Wip1和P53在肺非小细胞癌中表达和临床意义
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【摘要】目的 探讨Wip1和P53在肺非小细胞癌(NSCLC)中表达水平和临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR检测方法检测65例NSCLC组织(鳞癌34例,腺癌31例;高分化15例,中分化30例,低分化20例;按临床TNM分期:Ⅰ+Ⅱ期41例,Ⅲ+Ⅳ期24例;有淋巴结转移40例,无淋巴结转移25例)和20例正常肺组织做为对照组，测定两组肺组织中Wip1、P53蛋白的表达水平。结果 Wip1 mRNA在肺非小细胞癌以及正常的肺组织都有表达，研究可见NSCLC组织中Wip1和P53的表达率明显高于对照组 (P均<0.05)；在NSCLC不同分期之间，Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；在NSCLC是否伴随淋巴结转移之间Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；Wip1和P5在NSCLC组织中的表达呈正相关(P <0.05)。结论 Wip1和P53在肺非小细胞癌中的表达水平明显较高，能成为确定肿瘤恶性程度的分子生物学参考指标。
【关键词】肺非小细胞癌 Wip1 P53 表达 临床意义
中图分类号：R734.2 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)5-049-02
肺癌在癌症患者所占的比例不容忽视，肺癌分为小细胞癌和非小细胞癌，根据调查非小细胞肺癌占肺癌的40%以上，非小细胞肺癌的病因病机机制目前科学研究尚无明确定论，大量的专家学者认为可能与癌基因的激活和癌基因的的功能下降甚至缺失、突变有关[1，2]。为了进一步研究Wip1和P53在肺非小细胞癌中表达和临床意义，笔者通过本院2006年7月-2010年11月收治的65例NSCLC患者为观察组和20例健康肺组织为对照组采用实时荧光定量PCR检测方法检测，观察NSCLC组织中Wip1和P53在不同分期和淋巴是否转移之间的表达水平和相关性，为临床非小细胞肺癌的发病机制的研究和非小细胞肺癌的基因治疗提供依据，具体汇报如下：
1 临床资料和方法
1.1 一般资料
收集本院2006年7月-2010年11手术切除并且切除组织经病理确诊的非小细胞肺癌(NSCLC)标本65例,其中男35例,女30例鳞癌34例,腺癌31例;高分化15例,中分化30例,低分化20例;按临床TNM分期:Ⅰ+Ⅱ期41例,Ⅲ+Ⅳ期24例;有淋巴结转移40例,无淋巴结转移25例)。另外选20例正常肺组织作对照。
1.2 细胞培养
将提取的肿瘤细胞置于含青链霉素的DMEM培养基中，温度保持在37℃、CO2体积分数为5%培养箱中进行培养，4天换液一次，使用0.25%胰酶消化后收集细胞。
1.3 试剂
总RNA提取试剂Trizol选用invitrogen公司，RT逆转录试剂盒选用Toyobo公司，SYBR GreenⅠ选用Invitrogen公司，dNTPs选用Sigma公司，Taq酶选用美国ABI公司，0.25%胰酶溶液选用广州威佳科技有限公司产品。
1.4 仪器
紫外分光光度仪选用Beckman产品,凝胶成像及分析系统选用Bio-Rad产品,ABI 3900高通量DNA合成仪选用美国ABI产品。
1.5 总RNA制备
1.5.1 收集组织0.2g加入加Trizol溶液入1mL，摇匀，静置5分钟，让细胞充分裂解。
1.5.2 加50ml氯仿，充分混匀后，放置20min，温度保持在室温左右。
1.5.3 4℃下10000rpm离心15分钟, RNA位于上层水相，将RNA转移到一个新的RNase-free的离心管(一般3次)。
1.5.4 将RNA溶液异丙醇0.5ml，混匀，在室温左右静置5分钟。
1.5.5 4℃下10000rpm离心RNA溶液20 min，去上清，收集RNA。
1.5.6 用75%乙醇清洗离心管壁2次,超净台风干。
1.5.7 将溶液加入50μL DEPC水溶解沉淀，使用紫外分光光度仪器进行定量分析。
1.6 统计处理
采用SPSS16.0对所得数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间显著性比较采用t检验，组间显著性比较采用x2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1 非小细胞肺癌及正常肺组织中W ip1 mRNA的表达
Wip1 mRNA在肺非小细胞癌以及正常的肺组织都有表达，研究可见NSCLC组织中Wip1和P53的表达率明显高于对照组 (P均<0.05)；在NSCLC不同分期之间，Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；在NSCLC是否伴随淋巴结转移之间Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；Wip1和P5在NSCLC组织中的表达呈正相关(P <0.05)。具体见下表：
W ip1和p53蛋白在NSCLC及肺正常组织中的表达情况
肿瘤细胞中W ip1和p53的表达与临床病理特征的的关系[例(% )]
2.2 W ip1和P53相关性
W ip1和P53相关性相关性分析
W ip1和P53
说明：Wip1和P53在NSCLC组织中的表达呈正相关(P <0.05)。
3 讨论
野生型p53诱导的磷酸酯酶1(Wip1)是一种具有丝/苏氨酸酶活性的蛋白磷酸酶，是一种原癌基因，位于人体染色体17q22/q24区域，野生型p53诱·导的磷酸酯酶1(Wip1)在特定的条件下譬如应激、辐射等，能通过P53表达出[3]。p53是人体抑癌基因是编码为53kDa的蛋白质，当DNA受到损伤时表达产物增加，可以抑制细胞的周期，一旦p53基因发生失活或者突变，细胞分裂的能力失去控制，导致细胞癌变，根据临床研究，人类一半的癌症就是与p53基因发生失活或者突变有关[4]。本研究发现， Wip1mRNA在肺非小细胞癌以及正常的肺组织都有表达，研究可见NSCLC组织中Wip1和P53的表达率明显高于对照组 (P均<0.05)；在NSCLC不同分期之间，Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；在NSCLC是否伴随淋巴结转移之间Wip1和P53的表达差异具有统计学差异(P <0.05)；Wip1和P5在NSCLC组织中的表达呈正相关(P <0 ......
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