高压氧对鼻咽癌放射敏感性的影响及其作用机制的探讨
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【摘要】目的 探讨使用高压氧对鼻咽癌的放射敏感性的影响，并分析其作用机制。方法 将我院经传代培养的鼻咽癌菌株随机分为4组，I组为对照组，不使用任何方法；II组为高压氧治疗组，III组为放射治疗组，IV组为高压氧加放射治疗组。采用PI染色方法、MTT比色方法测量4组菌株的细胞增殖情况、细胞死亡情况。结果 IV组细胞的生长抑制率高于其他组别，p<0.05，IV组的细胞凋亡率高于其他组别，p<0.05。结论 采用高压氧联合放疗时，能有效地抑制鼻咽癌的菌株生长，高压氧能提高放射的敏感性。
【关键词】鼻咽癌 高压氧 放射敏感性
中图分类号：R454 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)7-435-02
鼻咽癌是临床的一种十分严重的恶性鼻粘膜肿瘤，其发病率正呈逐年上升趋势，并成为癌症的死亡率较高的一种疾病[1]。由于鼻咽癌的解剖部位十分特殊，其主要为低分化的鳞癌，恶性程度很高[2]，且会对邻近周围组织造成侵害，发生淋巴转移。临床治疗鼻咽癌多采用放射治疗，但是，经过多年的临床经验总结，采用单纯的放射治疗对患者的治愈率并不高，而且，经过长时间的治疗，患者可能会出现口腔粘膜、鼻粘膜等的放射反应，其毒副作用较大。有研究表明，高压氧能够提高放射敏感性，更好地改善患者肿瘤的氧合状况。我院为了证实此项研究，现进行一下试验，报告如下：
1 材料与方法
1.1 材料
材料选取人低分化的鼻咽癌CNE-2的细胞菌株，其菌株由中南大学湘雅医学院的肿瘤研究所提供。仪器主要包括：FACSCalibur流式细胞仪(由Bectionj-Dicknson公司生产)，SiemensPRIMUS直线加速器，MTT溶液5g/L，使用0.01mol.L的PBS配置，并采用0.22μm的微孔过滤器进行过滤除菌。染色液为50μg/ml的碘化丙啶。高压氧采用单人氧气加压舱。
1.2 方法
取正呈对数生长的CNE-2的细胞，使用0.25%的胰蛋白酶和0.02%的EDTA消化。同时使用含有10%的小牛血清RPMI的1640培养液，使其能分散出单细胞的悬液，通过调整，使细胞的密度在2×104个/ml。将细胞接种在平底型的培养板中，加入细胞的悬液。将细胞培养基放入在37℃，含有5%CO2的培养箱中，共培养24小时，是细胞能贴壁生长，基本形成单层后，将培养基分成4组。
I组菌株不使用任何方法，作为对照组。II组采用单纯的高压氧治疗，0.20MPa，60min。III组菌株采用单纯的放射疗法治疗，2Gy。IV组菌株采用高压氧联合放射治疗，先使用0.20MPa的高压氧处理60min，再立即使用2Gy进行放射治疗。
放射治疗方法：将培养基放置于直线加速器的治疗床上，并在其下垫5cm的有机玻璃板，并在上面放置一层1cm厚的组织等效胶。使用6MVX线进行照射，源皮距为100cm，使用剂量率为2Gy/min。
对各组细胞进行MTT比色方法，PI染色方法和流式细胞术，对各组细胞进行检测，主要观察细胞的增殖情况，细胞死亡情况和凋亡情况。
所有操作方法均严格按照说明说进行。
1.3 数据处理
将所得数据录入SPSS12.0软件进行统计学分析，计量资料采用(均数±标准差)表示，即(x±s)，自身前后对比采用t检验。计数资料采用x2检验。取95%可信区间，当p<0.05时，差异有统计学意义。
2 结果
4组细胞的生长抑制情况：经过本次实验后，II组、III组和IV组均发生细胞的生长抑制，其生长抑制率为，IV组抑制情况大于III组，III组大于II组，其中IV组的生长抑制率与II组和III组相比，p<0.05；III组的生长抑制率>II组，p<0.05，差异有统计学意义。
4组细胞的死亡情况和凋亡情况：经本次试验后的观察，4组细胞均发生了相应的死亡情况，其中IV组细胞死亡和凋亡最多，与I组、II组、III组相比，p<0.05。见表1。如图1~4.
表1.4 组细胞的生长抑制率、死亡率和凋亡率的情况比较(x±s)
3 讨论
鼻咽癌是我国较为常见的一种恶性肿瘤之一，被认为是一种多因素的基因遗传性肿瘤，尤其在我国的南方发病率较高。其发病可能与EB病毒、遗传因素、抑癌基因或多种癌基因的作用，周围的环境及饮食等有关[3]。临床治疗时，由于鼻咽癌的解剖部位深，结构复杂，恶性程度较高，发生淋巴转移情况较多，治疗较为困难。尽管放射治疗度此疾病较为敏感，而且放射治疗技术正不断提高，但是，其产生的毒副作用较高，治愈率较低。
肿瘤的乏氧细胞的存在，是成为鼻咽癌预后不良的主要因素[4]，据悉，在人类肿瘤的组织结构内，有三分之一以上的乏氧细胞，这些细胞对放疗、化疗甚至光动力治疗都有很高的抵抗能力，并更容易发生突变，加重患者的恶性程度，向周围转移。
高压氧经过临床经验证实，其能有效地提高肿瘤的氧分压情况，有效地改善肿瘤细胞的氧合情况，并能够对多种的肿瘤的细胞生长都会起到抑制作用。而且，高压氧能有效地增加肿瘤对放射治疗的敏感性。
高压氧疗法，在临床为患者治疗时，可以通过增加患者血液中的物理溶解的氧量，并能很好地提高患者血液中的氧气含量和血氧的张力。由于组织中的氧含量及氧储备都有了增加，其能有效地向周围组织进行氧气弥散，对其组织的微循环和气管的有氧代谢都会得到相应改善。
经过我院的本次试验证实，采用单纯的高压氧也能有效地抑制细胞生长，细胞也会发生凋亡和死亡情况。但是，采用高压氧与放射治疗联合，细胞的生长抑制率，细胞死亡率，细胞凋亡率与I组、II组、III组相比，p<0.05，差异有统计学意义。
经研究表明，高压氧的治疗下，能够使鼻咽癌的细胞内的活性氧的产生量增多，当鼻咽癌的细胞不能够很好地清除活性氧时，则鼻咽癌CNE-2的细胞生长就会发生抑制情况[5]。这种高压氧治疗还能诱导肿瘤细胞进行周期性的同步化，使细胞停留在对放射治疗敏感的G2/M时期，进而导致细胞的凋亡，使细胞增殖情况消失，并使细胞凋亡产生失去平衡，加速其消亡和发展。
细胞增殖和细胞凋亡的失平衡，是肿瘤发展发生过程的基本特征。通过高压氧联合放射治疗，我们实验证实 ......
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