支气管肺泡灌洗液中血管内皮细胞生长因子对支气管肺癌的诊断价值
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【摘要】目的 观察支气管肺癌患者肺泡灌洗液中血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)的表达，探讨其对支气管肺癌的诊断价值。方法 应用ELISA法检测24例肺癌患者支气管肺泡灌洗液及血清中VEGF的表达水平，并与同期15例健康体检者血清VEGF表达水平进行比较。结果 ①患者组血清VEGF表达水平明显高于正常对照组(P<0.01)②患者组灌洗液中VEGF表达水平明显高于血清中VEGF表达水平(P<0.01)③肺癌实验组中III期和IV期肺癌患者血清及肺泡灌洗液中VEGF表达水平明显均高于I期、II期肺癌患者VEGF表达水平(P<0.01)。结论 VEGF在肺癌发生发展中起重要作用，检测血清VEFG，尤其是支气管肺泡灌洗液VEGF水平对于判断肺癌的分期和预后具有一定价值。
【关键词】肺癌 肺泡灌洗液 血管内皮细胞生长因子
中图分类号：R734文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)11-138-02
近年来，有关研究[1]表明肿瘤的分子生物学因素与肿瘤的生长方式、速度、转移及预后等临床生物学行为密切相关。肿瘤细胞是代谢高度旺盛的细胞。新生血管的形成是肿瘤生长和发展的必经之路，与实体瘤的发生和转移有着密切关系。肿瘤血管生成受到肿瘤微环境中一系列生物因子的调节。其中血管内皮细胞生长因子Vascular endothelial cell growth factor (VEGF)是参与血管生成的主要正向调节因子，直接参与诱导肿瘤血管生成。肺癌患者血液、组织包浆液中的VEGF含量显著高于肺良性疾病患者和健康人[2]。本研究的目的是对支气管肺癌患者肺泡灌洗液中的血管内皮细胞(VEGF)含量进行检测，以期寻找肺癌早期诊断的特异性指标，也为临床肺癌的治疗提供新思路和新靶点。
1 材料与方法
1.1 对象
研究中24病例均为2008年6月至2009年10月在我院住院或门诊患者。经支气管镜及病理组织学检查证实为肺癌(鳞癌10例，腺癌10例，小细胞癌2例，未分型癌2例)。其中男性16例，女性8例，年龄46-83岁，平均63.0±6.0岁。根据2002年国际抗癌联盟(VICC)修订的标准进行TNM分期，I期-II期15例，III期-IV期9例。以上病例均经细胞病理学确诊, 且无放疗及化疗史，并经临床、实验室检查、X 线胸片及CT 等排除感染因素。选取15例健康体检者作为对照组，其中男性10例，女性5例，年龄最大81岁，最小50岁，平均62.0±5.0岁。肺癌病人组与健康对照组在性别、年龄等方面无统计学差异(p>0.05)。
1.2 主要试剂和主要器械
人血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒由美国R&D公司生产。
日本产OLYMPUS BF-30纤维支气管镜
酶标仪型号 DENLEY DRAGON WELLSCAN MK3 芬兰
1.3 标本采集
1.3.1 灌洗液采取:24例患者纤维支气管镜检查均在心电监护及血氧饱和度监护下进行并吸入高浓度氧。2%利多卡因粘膜麻醉后经鼻腔进入纤维支气管镜，固定纤支镜开口在病变部位段或亚段入口处，注入37度左右温生理盐水30-40毫升，接入灌洗瓶收集灌洗液，经离心后取上清液于-20度保存以作检测之用。
1.3.2 外周血的采取：所有研究对象于清晨8：00至10：00空腹抽取外周静脉血5毫升，经离心后取血清于-20度冰箱中保存作检测之用。
1.4 观察指标
肺泡灌洗液VEGF表达水平：采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测；
血清VEGF表达水平：采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测。
1.5 统计学处理
数据分析采用SPSS17.0统计分析软件。两组间比较采用t检验，对数据行描述性分析﹑正态性检验及方差齐性检验，在描述性分析中,对于正态分布的数据, 以均数±标准差(x±s)表示，正态分布数据经方差齐性检验后采用独立样本的t检验，非正态分布数据用两独立样本的非参数检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肺癌患者肺泡灌洗液及血清VEGF表达水平的比较
肺癌患者中肺泡灌洗液VEGF值与血清VEGF值分别为295.05±140.96pg/ml和159.67±85.69pg/ml。二组比较差异有显著性，p<0.01
表1 肺癌患者肺泡灌洗液VEGF值与血清VEGF值比较(x±s, pg/L)
注：两组比较，**P<0.01，下同
2.2 两组血清VEGF表达水平的比较
肺癌患者与健康对照组血清VEGF值分别为159.67±85.69pg/ml， 85.45±32.54pg/ ml。二组比较差异有显著性，p<0.01
表2 肺癌患者与健康对照组血清VEGF值比较(x±s, pg/L)
2.3 不同TNM 分期肺泡灌洗液中VEGF表达水平的比较
I期-II期与III期-IV期肺癌患者肺泡灌洗液中VEGF值分别是220.12±74.70pg/ ml，436.58±128.37pg/ml。二组比较差异有显著性，p<0.01
表3I期-II期与III期-IV期肺癌患者肺泡灌洗液VEGF值比较
(x±s, pg/L)
3 讨论
1989年Ferrara等[3]在牛垂体滤液星状细胞体外培养液中首先将血管内皮细胞生长因子(VEGF)纯化出来。因发现它有促血管内皮细胞有丝分裂的活性，称其为血管内皮生长因子/血管通透因子。血管内皮细胞生长因子家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及血小板生长因子。其中VEGF-C和VEGF-D是最先被确定能在体内介导新生血管生长的因子。现已知[4]，VEGF是最重要的促肿瘤血管生长因子之一，通过与其内皮细胞上的受体结合发挥以下作用：①直接刺激肿瘤血管内皮细胞分化、增殖和迁移。②提高血管通透性，加快肿瘤生长，血管生成及转移。VEGF mRNA与生理性的血管增殖有关，正常胚胎发育时有广泛和暂时的表达，在正常成年机体的生理状态下、血管生成被抑制，组织中VEGF呈低水平表达。在肿瘤组织中，VEGF的表达直接影响肿瘤血管的生成和原发瘤的生长与浸润，在不同类型的恶性肿瘤中，VEGF均有高水平表达。
Trape[5]等用ELISA法定量检测发现肺癌患者血清VEGF含量显著高于肺良性疾病患者和健康人,且肺癌患者外周血中的VEGF也有高水平表达。本研究亦发现，肺癌患者外周血中的VEGF水平较健康人对照组有明显提高(P<0.01)。肺癌组织中和肺癌伴胸腔积液患者胸腔积液中的VEGF亦有高水平表达[6]。但肺癌患者支气管肺泡灌洗液中VEGF表达是否出现类似情况仍鲜有报道。本研究的通过测定肺癌患者支气管肺泡灌洗液VEGF水平的表达情况，发现肺癌患者支气管肺泡灌洗液中VEGF表达水平较其血清VEGF水平显著升高(P<0.01) ......
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