PAI-1基因(CA)n微卫星多态性与多囊卵巢综合征孕早期自然流产的相关性研究(2)
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2.2 PCOS组自然流产与非自然流产患者临床指标比较
PCOS自然流产组的WHR为(0.78±0.06)，非自然流产组为(0.76±0.04)；PCOS自然流产组的LH为(11.02±5.62) (IU/L)，非自然流产组为(8.81±4.43) (IU/L)；PCOS自然流产组的LH与FSH之比(LH/FSH)为(3.24±1.43)，非自然流产组为(2.75±0.86)；PCOS自然流产组的快速胰岛素水平为(13.80±2.98)μIU/ml，非自然流产组为(12.72±2.76)μIU/ml，两者上述指标比较，差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS自然流产组的睾酮为(3.82±0.86)nmol/L，非自然流产组为(2.87±0.55)nmol/L；PCOS自然流产组的PAI-1活性水平为(81.84±21.58)ng/ml，非自然流产组为(60.80±18.05)ng/ml，两者上述指标比较，差异有统计学意义(P <0.00l)，见表2。
2.3 各组PAI-1基因型比较
共检测出12种基因型，PCR扩增片段在202-224bp，基因型分布按N ≤21和N> 21进行统计，结果见表3。群体基因型分布及等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。PCOS自然流产组CA重复序列拷贝数N≤21的例数明显高于非自然流产组(x2=6.461, P=0.011)和正常对照组(x2=16.214, P<0.001)，而POCS非自然流产患者与正常对照组相比，CA重复序列拷贝数N≤21的例数虽然高，但差异无显著性(x2=1.05, P=0.306)。(表3)
2.4 PAI-1活性与基因型和快速胰岛素和血糖水平的关系
各种基因型的PAI-1活性和快速胰岛素水平见表4。经直线相关与回归分析，结果如下：血浆PAI-1活性与CA拷贝数呈高度负相关(r=-0.902, b=-2.333, t=-6.591, P<0.001)；基因型相同者的血浆PAI-1活性均值与快速胰岛素水平均值呈显著正相关(r=0.751, b=1.686, t=3.596, P=0.0049)。PAI-1活性水平与快速血糖水平均值呈中度正相关关系(r=0.598, b=3.699, t=2.362, P=0.04)。
表1 两组试验对象临床参数比较(x±s)
表3 各组CA重复拷贝数分布
注：* 与正常对照组比较, P<0.001;# 与PCOS非自然流产组比较, P<0.05
表4 各种基因型的PAI-1活性和快速胰岛素和血糖平均水平
3 讨论
PCOS患者的主要临床特征为无排卵性不孕，一旦使用促排卵药物诱导或采取其它措施使其怀孕后，其自然流产率的发生却是相当高的。正常的妊娠需要有纤维蛋白溶解和凝固活性以及胎盘基板的稳固等微调特性，以此来防止过多的纤维素沉积在绒毛间隙和胎盘血管。纤溶酶原激活剂PAI-1由血管内皮诱导，在调节血管内的纤维蛋白溶解中起重要作用。以往许多研究结果表明PCOS患者体内存在血纤溶系统的失常，并且认为血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)水平的降低和(或)其抑制物(PAI-1)水平的升高是PCOS的危险因素之一。因此，在基因水平上探讨PAI-1基因多态性与PCOS及其孕早期自然流产的关系可为PCOS基因诊断、治疗提供帮助。
本研究发现，与PCOS非自然流产组相比，PCOS自然流产患者的WHR、睾酮T、 快速胰岛素水平以及PAI-1活性水平均明显升高，提示合并自然流产的患者纤溶活性明显降低，并存在明显的腹型肥胖和胰岛素抵抗。血浆PA1-1升高，纤溶活性下降，诱发胎盘血栓形成，过多的纤维素沉积在绒毛间隙和螺旋动脉中即可能阻碍血流，导致胎儿血供不足，造成滋养细胞生长阻碍而阻止妊娠的继续发展，这可能是妊娠失败的原因之一。因而，明确PAI-1基因中影响表达的序列异常，对揭示PCOS患者孕早期自然流产的发病机制将会有重要意义。
赵君利等的研究证实了中国PCOS患者的自然流产率高与PAI-1 4G基因型频率高有关，但国内尚未见PAI-1基因(CA)n微卫星多态性与PCOS自然流产关系的研究报道。我们的研究在进一步证实PCOS患者血浆PA I-1活性升高的基础上，发现中国汉族PCOS妇女PAI-1基因(CA)n微卫星多态性与其孕早期自然流产率高有关。本研究共检测出12种PAI-1基因CA重复序列基因型，PCR扩增片段在202-224bp，CA重复拷贝数在18～29之间，PCOS自然流产组CA重复拷贝数N≤21的例数明显高于正常对照组(P<0.001)和PCOS非自然流产组(P<0.05)，而后者与正常对照组相比，CA重复序列拷贝数N≤21的例数差异无显著性(P>0.05)。表明PAI-1基因(CA)n微卫星多态性可能与PCOS患者自然流产率高息息相关，但却并非与所有的PCOS患者都有关。本研究显示，PAI-1的抗原活性水平与(CA)n重复序列基因型有关，拷贝数越少，血浆PAI-1活性水平越高，以往的研究也有过类似相同结果。可见，PAI-1的合成是受其基因控制的，Dawson S等认为这种现象的原因在于(CA)n重复区域是拓扑异构酶II的作用位点，这种嘌呤-嘧啶结合可使超螺旋DNA结构变成环状DNA，通过复制、转录和重组从而引起血浆PAI-1活性的变化。
本研究还发现PAI-1活性与胰岛素和葡萄糖呈显著正相关关系，与以往的研究报道胰岛素和葡萄糖是PAI-1基因表达的调节因素相符。胰岛素的主要作用是调节机体的糖代谢，如果一定量的胰岛素产生的生物学效应低于实际应有水平，亦即胰岛素敏感性降低，则称为胰岛素抵抗(IR)。本资料显示PCOS患者胰岛素明显高于正常对照组，而且PCOS患者中自然流产组胰岛素水平明显高于非自然流产组，提示血清胰岛素的增高与PCOS自然流率高有相关性。Kietzmann等在研究胰岛素如何加强PAI-1基因表达时提出胰岛素是通过磷酸酰肌醇(-3)激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路发挥一系列生物学作用，胰岛素通过转录因子HIF-1结合到PAI-1基因启动子的HREs反应成分从而诱导PAI-1基因表达。胰岛素和血糖能够刺激内皮细胞分泌PAI-1，IR状态下的高胰岛素水平可通过正常的非代谢通路使PAI-1合成增加。因此，我们认为胰岛素和血糖可能是PAI-1活性的主要调节因子，可通过增加PAI-1活性而降低其纤溶能力。IR引起机体PAI-1活性增加使纤溶系统活性降低的因素，可能与 PCOS患者自然流产率高有关 ......
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