缺血性脑卒中患者CD56和CD69表达的研究(1)
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【摘要】目的 探讨缺血性脑卒中患者外周血淋巴细胞CD56和CD69的表达及其与临床病情程度的关系。方法 采用流式细胞术动态检测了22例中重型缺血性脑卒中患者在发病后3天内外周血淋巴细胞CD56和CD69的表达情况，并选择22例同期住院病人作为对照。结果 CD56和CD69在缺血性脑卒中患者急性期是升高的，在发病后3天其升高程度与病情的严重程度有关，病情越重，升高越明显。结论 在缺血性脑卒中患者外周血淋巴细胞CD56和CD69发生显著变化，其变化程度与临床病情的严重程度有密切关系。
【关键词】缺血性脑卒中 淋巴细胞
中图分类号：R743.3文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)11-050-02
CD56为神经细胞粘附分子(NCAM)，是由多个多肽链组成的糖蛋白，是免疫球蛋白超家族的成员，主要表达在T淋巴细胞和NK细胞上，调节MHC非限制性细胞毒性作用。CD56也可以表达在神经组织上，与细胞粘附有关[1]。CD69是T细胞最早表达的抗原，当其表达以后可作为辅助刺激分子使细胞进一步活化和增殖[2]。我们通过用流式细胞术(FCM)检测22例中重型缺血性脑卒中患者外周血淋巴细胞CD56和CD69的表达情况，来探讨其变化及与临床病情程度的关系。
1 对象和方法
1.1 对象选择
缺血性脑卒中组(简称卒中组)：22例，其中男10例，女12例，平均年龄(68.2±9.1)岁。病损程度：中型13例，重型9例，发病时间均在3天内，全部病例均符合1995年全国第四次脑血管病学术会议制订的诊断标准，患者的病变部位均位于颈内动脉系统。对照组：22例，其中男15例，女7例，平均年龄(63.4±9.2)岁，为同期除外脑血管病的住院病人。患者和对照组除外标准：感染、肿瘤、组织损伤和近期应用免疫抑制剂。卒中组的年龄、性别、血管病危险因素、血糖、甘油三酯、总胆固醇、淋巴细胞水平等临床一般特征与对照组比较均无明显差异(P值均>0.05)。
1.2 方法
1.2.1 标本收集 卒中组于发病3d内抽取肘静脉血1ml，2%EDTA-Na21:9抗凝，2h离心(3000转/min，10min)取抗凝全血100ul，分别加入FITC标记的CD56和CD69单克隆抗体20ul，混匀后室温避光孵育30min，阴性对照以FITC标记的同型抗体代替。用全血标本处理仪，经配套产品进行溶红细胞、稀释和固定后，24h内用流式细胞仪检测。配套软件取数和分析。每个样本分析5000个细胞，结果以阳性细胞百分率(%)表示。
1.2.2 化学试剂：CD56—FITC单克隆抗体和CD69—FITC单克隆抗体为美国Immunotech公司产品。
1.2.3 统计学数据处理：所有资料均采用SPSS9.0统计软件进行分析。采用x2检验、t检验、直线相关分析。显著水平为α=0.05。数据表达采用均数±标准差(x±s)。
2结果
2.1 卒中组和对照组外周血淋巴细胞CD56和CD69阳性细胞百分率的比较
卒中组淋巴细胞CD56和CD69阳性细胞百分率均高于对照组(P值均<0.05)见表1。
表1 卒中组和对照组淋巴细胞
CD56和CD69阳性细胞百分率比较(%)
注* P=0.022，** P=0.003。
2.2 不同病损程度的卒中患者淋巴细胞CD56和CD69的阳性细胞百分率
病情为重型患者淋巴细胞CD56和CD69的阳性细胞百分率均高于病情为中型的患者(P值均<0.05)见表2。
表2 不同病损程度的卒中患者淋巴细胞
CD56和CD69阳性细胞百分率比较(%)
注 * P=0.038，** P=0.042。
2.3 卒中患者淋巴细胞CD56和CD69表达之间的相关性
卒中患者淋巴细胞CD56和CD69表达之间无显著相关性。
2.4 卒中患者淋巴细胞CD56和CD69的表达与淋巴细胞数的关系
卒中患者淋巴细胞数平均为(1.58±0.64)109/L，与CD56和CD69的表达无显著相关性。
3 讨论
在急性脑缺血性损伤中常常同时涉及到炎性过程。在动物卒中模型中发现，缺血后12h外周血白细胞开始移行到脑实质中，这些细胞能分泌众多不同的细胞因子和炎性介质，它们中有些被认为能诱发细胞损伤并能明显地加重再灌注损伤。更为重要的是，炎性细胞浸润与细胞凋亡密切有关，早期遍布梗死区，后期见于周边区[3]。CD56和CD69在淋巴细胞被激活时表达增高。由于CD69是T细胞激活以后最早表达的抗原，故以前被称作激活诱导分子。国内学者对缺血性脑卒中外周血的免疫功能检测的多数结果表明，淋巴细胞转换率降低，总T细胞减少，CD4+/CD8+比例下降。但未见国内外学者对缺血性脑卒中患者CD56和CD69变化研究报道。我们的结果表明：在缺血性脑卒中急性期CD56和CD69的表达升高。浸润的白细胞通过阻塞微循环和释放血管收缩物质减少血流量，分泌蛋白酶、氧自由基等细胞毒性物质损伤组织，因此病情越重，淋巴细胞在梗塞部位就越多，淋巴细胞CD56和CD69的表达也应增高。我们的结果还发现，病情越重，CD56和CD69的表达水平升高越明显。
对中枢神经系统变性疾病、病毒感染和脑型疟疾病的研究发现，T细胞最早激活的标志是CD69抗原的表达[2]。CD56可表达在星形胶质细胞上[4]。有研究报道，中枢神经系统表达的CD56，是狂犬病毒侵入细胞的一个受体，在CD56基因“敲除”鼠中，可以推迟感染狂犬病毒鼠的死亡，病理检查发现中枢神经系统感染病灶非常局限[5]。在一例EBV感染的患者中有病灶性脑损伤，外周血CD56+细胞升高39%~55%[6]。所以CD56和CD69与神经系统疾病有着密切关系。
近几年研究已确定脑卒中能引起T细胞的异常反应。Jander等[7]应用光化学诱导的大鼠皮质缺血研究中发现，在光栓后1~2d T细胞粘附在软脑膜下和皮质的血管，在巨噬细胞之前侵入到缺血损伤区，第3天出现大量的T细胞和一些巨噬细胞，其数量在3~7d间进一步增加，并已浸润至损伤区周围，第14天T细胞数量下降。在慢性低灌注的大鼠大脑研究中发现[8]，在结扎双侧颈总动脉后1h ......
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