新鲜羊膜移植术治疗急性期角膜碱烧伤的实验分析
中图分类号：R772.2文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)12-141-02
观察、比较新鲜羊膜移植术和保存羊膜移植术在急性期角膜碱烧伤治疗中抑制角膜炎症反应和新生血管生成及促进角膜上皮愈合的作用；探讨羊膜移植的作用机理及对角膜组织结构方面的影响。
1 方法
1.1 羊膜的制备 通过产前血清学检查，选择健康剖宫产的产妇，在净化工作台上获得羊膜组织，置于羊膜处理液中浸泡20分钟，将其平铺于硝酸纤维滤纸上，剪成4×4 cm2大小，新鲜羊膜在4℃保存，6小时以内使用。保存羊膜置于羊膜保存液内，-80℃冷冻保存，一月以内使用。
1.2 实验分组和方法 选24只健康新西兰大白兔随机分为A、B、C3个组，每组8只兔，选定右眼为实验眼，设立A组为对照组(A组)，B组为新鲜羊膜移植组(fAMT)，C组为保存羊膜移植组(pAMT)。
1.3 兔角膜碱烧伤模型的建立 健康新西兰大白兔24只，将浸泡在1mmol/l氢氧化钠溶液中的直径为15mm大小的滤纸置于兔实验眼角膜表面1分钟，然后用30ml生理盐水冲洗眼表面，于烧伤后24小时之内手术。
1.4 术后每日裂隙灯显微镜下观察角膜上皮愈合情况及新生血管生长情况，并于术后14天、28天用计算机图像分析系统定量测定新生血管及上皮愈合面积。术后14天、28天取材角膜进行组织病理检查，从计算机图像分析系统测量其多形核白细胞含量，透射电镜观察角膜超微结构的改变。
2 结果
2.1 羊膜移植对角膜新生血管及角膜上皮愈合的影响 术后14天，新生血管面积B组(49.25±5.68 mm2)小于C组(52.55±5.68 mm2), P>0.05，两者相比无显著差异；B组(49.25±5.68 mm2)与A组(63.00±7.28 mm2)、C组(52.55±5.68 mm2)与A组(63.00±7.28 mm2)相比较, P<0.05，两者均有显著差异。上皮愈合面积B组(31.38 ±10.60 mm2)大于C组(23.05± 9.43 mm2),P<0.05，两者相比有显著差异；B组(31.38 ±10.60 mm2)与A组(9.67±4.57 mm2)、C组(23.05± 9.43 mm2)与A组(9.67±4.57 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。术后28天,新生血管面积B组(85.87± 3.56 mm2)与C组(93.66± 5.12 mm2)、B组(85.87± 3.56 mm2)与A组(103.13± 6.70 mm2)、C组(93.66± 5.12 mm2)与A组(103.13± 6.70 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。上皮愈合面积B组(123.77± 3.94 mm2)与C组(122.82± 3.37 mm2)相比较，P>0.05，两者相比无显著差异；B组(123.77± 3.94 mm2)与A组(115.24± 4.67 mm2)、C组(122.82± 3.37 mm2)与A组(115.24± 4.67 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。
2.2 测量角膜组织中多形核白细胞含量 术后14天，B组(11.08 ±2.95) ×103μm-2与C组(24.96± 3.32) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比有显著差异; B组(11.08±2.95) ×103μm-2与A组(36.02± 3.88) ×103μm-2、C组(24.96± 3.32) ×103μm-2 与A组(36.02± 3.88) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。术后28天, B组(7.61 ±1.65) ×103μm-2与C组(12.96± 2.31) ×103μm-2相比较，P>0.05，两者相比无显著差异；B组(7.61 ±1.65) ×103μm-2与A组(29.67± 3.75) ×103μm-2、 C组(12.96± 2.31) ×103μm-2 与A组(29.67± 3.75) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。
2.3 术后组织病理学检查 术后14天，A组角膜基质中有大量多形核白细胞浸润，有新生血管生成，角膜上皮排列疏松、紊乱，部分缺失； B组角膜基质中多形核白细胞浸润最少，有较少量新生血管生成，角膜上皮排列较整齐，上皮形状较规则；C组角膜基质中有少量多形核白细胞浸润，有少量新生血管生成，角膜上皮排列不整齐，上皮形状不规则。术后28天， A组仍可见大量的多形核白细胞浸润,上皮细胞排列紊乱,不规则; B组角膜内多形核白细胞浸润少,羊膜与下方的角膜基质融合,上皮排列较规则；C组仍可见少许多形核白细胞浸润,上皮基底细胞形态扁平,排列欠规则。
2.4 羊膜移植对角膜超微结构的影响 A组角膜上皮细胞之间间隙增大，局部桥粒消失,细胞质内有大小不一的空泡; B组角膜上皮细胞基底膜完整,细胞之间有大量桥粒,角膜基质层有丰富的胶原原纤维,纤维之间的成纤维细胞内有丰富的粗面内质网和大量线粒体; C组角膜上皮细胞基底膜完整,细胞之间有较多桥粒,细胞之间仍有大小不等的间隙,有的细胞核内出现空泡,局部核膜消失。
3 结论
在角膜碱烧伤急性期治疗中，新鲜羊膜移植可抑制角膜新生血管生成和促进角膜上皮愈合，有更强的抑制炎症反应和促进角膜上皮化的作用，其效果优于保存羊膜。, 百拇医药(魏光美 季长明 陈翠)
观察、比较新鲜羊膜移植术和保存羊膜移植术在急性期角膜碱烧伤治疗中抑制角膜炎症反应和新生血管生成及促进角膜上皮愈合的作用；探讨羊膜移植的作用机理及对角膜组织结构方面的影响。
1 方法
1.1 羊膜的制备 通过产前血清学检查，选择健康剖宫产的产妇，在净化工作台上获得羊膜组织，置于羊膜处理液中浸泡20分钟，将其平铺于硝酸纤维滤纸上，剪成4×4 cm2大小，新鲜羊膜在4℃保存，6小时以内使用。保存羊膜置于羊膜保存液内，-80℃冷冻保存，一月以内使用。
1.2 实验分组和方法 选24只健康新西兰大白兔随机分为A、B、C3个组，每组8只兔，选定右眼为实验眼，设立A组为对照组(A组)，B组为新鲜羊膜移植组(fAMT)，C组为保存羊膜移植组(pAMT)。
1.3 兔角膜碱烧伤模型的建立 健康新西兰大白兔24只，将浸泡在1mmol/l氢氧化钠溶液中的直径为15mm大小的滤纸置于兔实验眼角膜表面1分钟，然后用30ml生理盐水冲洗眼表面，于烧伤后24小时之内手术。
1.4 术后每日裂隙灯显微镜下观察角膜上皮愈合情况及新生血管生长情况，并于术后14天、28天用计算机图像分析系统定量测定新生血管及上皮愈合面积。术后14天、28天取材角膜进行组织病理检查，从计算机图像分析系统测量其多形核白细胞含量，透射电镜观察角膜超微结构的改变。
2 结果
2.1 羊膜移植对角膜新生血管及角膜上皮愈合的影响 术后14天，新生血管面积B组(49.25±5.68 mm2)小于C组(52.55±5.68 mm2), P>0.05，两者相比无显著差异；B组(49.25±5.68 mm2)与A组(63.00±7.28 mm2)、C组(52.55±5.68 mm2)与A组(63.00±7.28 mm2)相比较, P<0.05，两者均有显著差异。上皮愈合面积B组(31.38 ±10.60 mm2)大于C组(23.05± 9.43 mm2),P<0.05，两者相比有显著差异；B组(31.38 ±10.60 mm2)与A组(9.67±4.57 mm2)、C组(23.05± 9.43 mm2)与A组(9.67±4.57 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。术后28天,新生血管面积B组(85.87± 3.56 mm2)与C组(93.66± 5.12 mm2)、B组(85.87± 3.56 mm2)与A组(103.13± 6.70 mm2)、C组(93.66± 5.12 mm2)与A组(103.13± 6.70 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。上皮愈合面积B组(123.77± 3.94 mm2)与C组(122.82± 3.37 mm2)相比较，P>0.05，两者相比无显著差异；B组(123.77± 3.94 mm2)与A组(115.24± 4.67 mm2)、C组(122.82± 3.37 mm2)与A组(115.24± 4.67 mm2)相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。
2.2 测量角膜组织中多形核白细胞含量 术后14天，B组(11.08 ±2.95) ×103μm-2与C组(24.96± 3.32) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比有显著差异; B组(11.08±2.95) ×103μm-2与A组(36.02± 3.88) ×103μm-2、C组(24.96± 3.32) ×103μm-2 与A组(36.02± 3.88) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。术后28天, B组(7.61 ±1.65) ×103μm-2与C组(12.96± 2.31) ×103μm-2相比较，P>0.05，两者相比无显著差异；B组(7.61 ±1.65) ×103μm-2与A组(29.67± 3.75) ×103μm-2、 C组(12.96± 2.31) ×103μm-2 与A组(29.67± 3.75) ×103μm-2相比较，P<0.05，两者相比均有显著差异。
2.3 术后组织病理学检查 术后14天，A组角膜基质中有大量多形核白细胞浸润，有新生血管生成，角膜上皮排列疏松、紊乱，部分缺失； B组角膜基质中多形核白细胞浸润最少，有较少量新生血管生成，角膜上皮排列较整齐，上皮形状较规则；C组角膜基质中有少量多形核白细胞浸润，有少量新生血管生成，角膜上皮排列不整齐，上皮形状不规则。术后28天， A组仍可见大量的多形核白细胞浸润,上皮细胞排列紊乱,不规则; B组角膜内多形核白细胞浸润少,羊膜与下方的角膜基质融合,上皮排列较规则；C组仍可见少许多形核白细胞浸润,上皮基底细胞形态扁平,排列欠规则。
2.4 羊膜移植对角膜超微结构的影响 A组角膜上皮细胞之间间隙增大，局部桥粒消失,细胞质内有大小不一的空泡; B组角膜上皮细胞基底膜完整,细胞之间有大量桥粒,角膜基质层有丰富的胶原原纤维,纤维之间的成纤维细胞内有丰富的粗面内质网和大量线粒体; C组角膜上皮细胞基底膜完整,细胞之间有较多桥粒,细胞之间仍有大小不等的间隙,有的细胞核内出现空泡,局部核膜消失。
3 结论
在角膜碱烧伤急性期治疗中，新鲜羊膜移植可抑制角膜新生血管生成和促进角膜上皮愈合，有更强的抑制炎症反应和促进角膜上皮化的作用，其效果优于保存羊膜。, 百拇医药(魏光美 季长明 陈翠)