PCNA、凋亡与子宫内膜异位症恶变的研究(1)
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【摘要】目的 探讨PCNA、凋亡与子宫内膜异位症恶变的关系，并为肿瘤划分良、恶性及判断预后提供指标。方法 本研究应用免疫组化及细胞凋亡原位检测技术(TUNEL法)检测PCNA、凋亡在30例子宫内膜异位症恶变肿瘤中的表达，对异位区与恶变区进行比较。结果 子宫内膜异位症恶变内膜PCNA表达(增殖指数PI=31.7391±20.19395) 及凋亡细胞表达(凋亡指数AI=9.0000±6.27631)均明显高于子宫内膜异位症内膜(PI=13.9130±10.76152;AI=5.2609±2.86431)(p<0.05)，而且，在癌组织中PI与AI之间表达有相关性(p<0.05)。结论 子宫内膜异位症恶变内膜PCNA、凋亡表达显著增强，提示肿瘤不但是细胞增殖与分化异常，同时也是凋亡异常的疾病。子宫内膜异位症恶变过程中，由于细胞增殖增强，凋亡受抑而形成高增殖活性的细胞。肿瘤形成后细胞凋亡随着肿瘤的生长也逐渐增加。
【关键词】子宫内膜异位症恶变 PCNA 凋亡
中图分类号：R711.71文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)12-078-02
前言
子宫内膜异位症为妇科常见的疾病之一，Sampson(1925年)[1]首次报道子宫内膜异位症恶变病例，进来国内外的文献报道越来越多[2]，虽然子宫内膜异位症是良性病变，但少数呈具有恶性潜能的肿瘤性病变过程[3]。
众多研究表明，肿瘤的发生与细胞的异常增殖及凋亡失调有关。
增殖细胞核抗原(PCNA)又称周期素，是评价细胞增殖活性的良好指标。
细胞凋亡(apoptosis),即程序性细胞死亡，是在生理或病理条件下，由基因调控的细胞主动程序化死亡过程。
本研究应用免疫组化及细胞凋亡原位检测技术，检测细胞增殖相关因子PCNA与凋亡在30例子宫内膜异位症恶变病例中的表达，并对良性异位区与恶性区对比，旨从肿瘤细胞的增殖和凋亡两方面探讨子宫内膜异位症恶变发生的可能机制，并为划分良、恶性及判断预后提供一些客观指标，以利治疗方案的选择。
1 材料与方法
1.1 一般资料
病例取自2005年至2010年间，大连市妇产医院、大连市中心医院收治的子宫内膜异位症恶变病例，经病理医师复审病理切片，临床资料和蜡块保存完整、可用于研究的共30例，其中卵巢子宫内膜样癌19例，卵巢透明细胞癌5例，子宫腺肌病癌变4例，盆腔子宫内膜样囊肿癌变2例。患者平均年龄53岁。所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，制作4μm行免疫组化染色，一张行HE染色对照。
1.2 免疫组化染色
1.2.1 鼠抗人增殖细胞核抗原(PCNA)单抗(Pc10)，即用型,产品购自福州迈新生物技术开发有限公司，采用S-P染色方法，具体步骤按照试剂盒上说明进行，DAB显色，以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，用已知的阳性片为对照。
1.2.2 细胞凋亡原位检测方法(TUNEL), 原位细胞凋亡检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品。
1.3 阳性判断标准及计数
1.3.1 染色阳性反应判断标准
PCNA阳性表达定位于细胞核，免疫组化半定量评分标准进行染色强度评分：阳性细胞百分数<5%为(-)，计0分；5%～20%为(+)，计1分；21%～50%为(++)，计2分；>50%为(+++)，计3分。
1.3.2 指数计算
增殖指数(PI):高倍视野下计数1000个肿瘤细胞中PCNA阳性细胞数所占百分比作为PI；
凋亡指数(AI):高倍视野下计数1000个肿瘤细胞中核着黄色的凋亡细胞数所占百分比作为AI。
1.4 统计学处理
应用SPSS12.0 for windows 统计软件包进行统计学分析：计量资料(PCNA)采用成组设计的两样本的秩和检验(Mann-Whitnoy U检验)，以P〈0.05为有差异，有统计学意义；记数资料(凋亡指数AI、增殖指数PI)采用成组设计的两样本均数的T检验，以P<0.05为差异，有统计学意义。以Spearman相关分析法比较凋亡指数(AI)与增殖指数(PI)的相关性，以P<0.05为有相关性。
2 结果
2.1 PCNA在子宫内膜异位症异位及癌变内膜中的表达(增殖指数PI)
PCNA阳性表达定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状。PCNA蛋白在异位内膜的表达PI平均值为13.9130，在癌变内膜的表达PI平均值为31.7391，二者之间的阳性表达在统计学上有显著性差异(P﹤0.05)。见表1。
表1 PCNA在子宫内膜异位症异位及癌变内膜中的表达(增殖指数PI)
2.2 凋亡细胞在子宫内膜异位症异位及癌变内膜中的表达(凋亡指数AI)
凋亡细胞与周围细胞分离，其阳性表达定位于细胞核，呈棕色或棕黄色，同时细胞核呈不同程度的固缩状态，形态各异，可呈圆形、分叶状和不规则形。见照片5。
凋亡细胞在异位内膜的表达AI平均值为5.2609，在癌变内膜的表达AI平均值为9.0000，二者之间的阳性表达在统计学上有显著性差异(P<0.05)。见表2。
表2 凋亡细胞在子宫内膜异位症异位及癌变内膜中的表达(凋亡指数AI)
2.3 子宫内膜异位症异位及癌变内膜增殖指数与凋亡指数的相关性
经Spearman相关性分析，30例子宫内膜异位症异位内膜的AI与PI无相关性，r=-0.115，P>0.05。子宫内膜异位症癌变内膜的AI与PI有相关性，r=0.591，P<0.05；且PI>AI。
3 讨论
在一个多细胞机体内，具有自我更新能力的组织一方面通过有丝分裂不断产生新细胞，另一方面生理上不需要、老化及受损的细胞通过由基因调控的主动的程序性细胞死亡(即凋亡)而被清除。细胞的增殖、分化和凋亡相互之间的协调共同参与胚胎发育、组织修复等生命过程，它们之间的平衡是组织稳定性的先决条件。当这种平衡失调，增殖超过凋亡，就为肿瘤发生提供了重要基础。目前，众多研究认为凋亡和增殖的异常会导致肿瘤的发生。
3.1 PCNA与子宫内膜异位症恶变的关系
细胞周期调控异常是恶性肿瘤的重要特征，在周期的各个阶段转换中以G/S转换最重要，PCNA是一种酸性核蛋白，是DNA聚合酶?的辅助蛋白，是细胞核内DNA合成不可缺少的因子 ......
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