3种方法检测HBsAg比较分析
 |
| 第1页 |
参见附件(1411KB，1页)。
【摘要】目的 比较胶体金免疫层析试验(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及化学发光酶免疫分析(CLEIA)检测HBsAg的效果，减少漏检或误诊，为临床选择一种经济、快速、准确、敏感检测乙型肝炎病毒(HBV)的方法。方法 分别用三种方法检测974份血清标本中的HBsAg，并对测定结果进行比较分析。结果 三种方法检测HBsAg阳性率差异无统计学意义 (P>0.05)，但CLEIA法灵敏度特异度高于ELISA法、ELISA法灵敏度特异度高于GICA法。结论 三种方法都可能存有漏检或误诊，检测HBsAg时应针对不同的检测目的、不同的人群，采用不同的检测方法，临床阳性诊断时应不同方法间相互验证。
【关键词】胶体金免疫层析试验 酶联免疫吸附试验 化学发光酶免疫分析 乙型肝炎表面抗原
中图分类号：R446.6 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2012)3-329-01
乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，感染后引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有密切的关系。感染乙型肝炎病毒( HBV)后，机体会产生各种抗原抗体血清学免疫应答反应，HBsAg(乙型肝炎表面抗原)是HBV感染后第一个标志物，是提示血清有潜在传染性的最好的间接指标。然而，由于检测试剂的灵敏度、特异度差异，采用不同方法检测HBsAg时存在部分检测结果不同的现象，并会造成一定程度的误诊和漏诊，甚至引发医患矛盾或医疗纠纷。目前我科用GICA法、ELISA法、CLEIA法三种方法对HBsAg标本进行测定，为了比较这些方法所检测结果的一致性，我们对974份血清标本进行了平行检测，现报告如下：
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
桂林优利特URIT-680全自动酶标洗板机，奥地利2010全自动酶联免疫检测仪。胶体金法由艾康生物技术(杭州)有限公司提供；ELISA试剂盒由英科新创(厦门) 科技有限公司提供； CLEIA试剂盒及化学发光仪由安图实验仪器(郑州)有限公司提供。所用试剂均在有效期内。
1.2 样本来源
2011年7月～12月新乡市中心医院门诊部、住院部及体检中心提供检验的974份血清标本。
1.3 方法
实验操作均按试剂盒说明书进行。
1.4 结果判断
(1)方法学阳性结果判断
GICA法 试纸条在检测线和对照线位置出现两条紫红色线结果为阳性
ELISA法 样本OD值S/C.O.≥1.0者为HBsAg阳性
样本OD值S/C.O.<1.0者为HBsAg阴性
CLEIA法 HBsAg浓度值>0.15ng/ml为阳性
(2)临床阳性结果判断标准，以下三个条件满足其一即可
①三种方法都呈阳性
②若一种方法为阴性，另外两种方法至少复检两次均呈阳性
③CLEIA法复检浓度值均为 0.15ng/m
2 结果
974份血清标本，最终临床结果诊断阳性人数为83人。GICA法检测出阳性78人，阳性率为8.00%；ELISA法检出阳性82人，阳性率为8.41%；CLEIA法检出阳性84人，阳性率为8.62%(见下表)。三者平行检测阳性率无差异(P>0.05)。
三种方法阳性比较
结果中，4例GICA法检测阳性的标本，ELISA法倍比稀释后两例显示阳性、两例显示阴性，CLEIA法与ELISA法结果一致。6例ELISA法检测阳性的标本，GICA法判定为阴性，CLEIA法判定为阳性。2例CLEIA法检测阳性(浓度值分别为0.18 ng/ml、0.20 ng/ml)的标本，用GICA法、ELISA法均为阴性。其中浓度值为0.18ng/ml的标本，依据乙肝五项模式最终判断为假阳性即浓度值<0.15ng/ml。结果表明CLEIA法灵敏度特异度高于ELISA法、ELISA法灵敏度特异度高于GICA法。
3 讨论
本实验中①有两例GICA法检测为阳性的标本——检测区域线条显色较浅，ELISA法复检至少两孔，均为阴性；CLEIA法复检亦为阴性。多有文献报道GICA法易出现假阴性现象，而假阳性现象报道较少，此现象有待扩大标本量进一步研究探讨。②有6例ELISA法、CLEIA法检测阳性的标本，其中3例S/C.O.值<2.0、浓度<1.0ng/ml，3例S/C.O.值≥3.0、浓度>6.0ng/ml，而GICA法均判定为阴性。前3例标本浓度值显示呈弱阳性，这与其它文献报道胶体金显色需要较高浓度的标记物，在HBsAg浓度较低(浓度小于1ng/ml)的标本其灵敏度会受到一定限制，易出现假阴性，造成漏检相符[1]。而后3例标本浓度值均非弱阳性，而GICA法判定为阴性，说明GICA法在高浓度值下亦可出现假阴性。有文献认为少量强阳性标本漏检，可能与标本抗原抗体不成比例，免疫复合物显色时间延长有关[2]，而我们延长观察时间至少一倍以上，检测线位置仍未出现紫红色线。这种漏检的现象，我们考虑可能是少数标本中存在HBV的亚型而使HBsAg试纸条不易检出，其依据有待进一步研究论证。③2例CLEIA法检测阳性，用GICA法、ELISA法均为阴性。我们分析标本HBsAg浓度值过低，GICA法、ELISA法的灵敏度特异度略低造成漏诊。故ELISA法测定标本的OD值在cut off附近，即检测灰区时，建议用CLEIA复检。另外，CLEIA法采用函数拟合方式：以系列定标品浓度值的对数值为横坐标，以定标品发光值的对数值为纵坐标，建立(log-log)线性回归曲线，由血清样品发光值，在定标曲线上进行计算，对应相应的浓度值。因此检测结果受定标品值及参考曲线的线性系数的影响，因此我们应该定期更换定标品，注意参考曲线的线性系数要不小于0.9900，尽可能的排除人为因素及方法学带来的误差，检测结果必要时依据临床意义及乙肝五项模式进行判断。
GICA法检测HBsAg具有简便快速、可单份操作及易于观察等优点。但由于胶体金显色需要较高浓度的标记物，且可出现假阳性、假阴性现象，故其灵敏度、特异度受到一定限制。因此GICA法适合急诊手术患者的筛选，但为了确保检验结果的准确及临床用血的安全，经GICA初筛后的的标本尤其是阴性及弱阳性标本仍需用ELISA法进行复检，必要时行CLEIA法复检。ELISA法检测HBsAg是目前应用最广泛的免疫检测方法，其各项诊断指标比较理想且成本较低，基本满足了临床诊断的需求。尤其试剂盒稀释液中加“扫把”抗体，有效地削除了非特异性结合及“前带”现象，提高了检测的准确性。但该法中间操作环节多，检测时间较长，易交叉污染，容易出现钩状效应(HOOK)和哈马效应(HAMA)，出现检验结果误诊或漏诊现象。因此ELISA法检测出的阳性标本应用GICA法复检 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1411KB，1页)。