低中剂量乙醇对培养大鼠心室肌乳酸脱氢酶2作用的研究(1)
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【摘要】目的 探讨低中剂量乙醇对培养大鼠心室肌细胞ALDH2表达的影响；方法 利用原代培养新生大鼠心室肌细胞，用不同浓度乙醇进行处理，利用缺氧试剂盒制备心肌细胞缺氧模型，通过流式细胞仪检测乙醇干预后心肌细胞凋亡变化。采用免疫荧光技术检测ALDH2表达。结果 新生大鼠心肌细胞原代培养纯度达90%以上，流式细胞仪检测结果显示：低中剂量范围内乙醇浓度和缺氧诱导心肌细胞凋亡之间呈现一种U型关系。结论 在低中剂量范围内，乙醇剂量与缺氧诱导心肌细胞凋亡之间呈U型关系。低中剂量乙醇可能是或至少部分是通过上调ALDH2，抑制心肌细胞凋亡发挥心肌保护作用。
【关键词】ALDH2 心肌细胞 乙醇 细胞凋亡
中图分类号：Q554.07 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2012)3-073-03
【Abstract】Objective To investigate the low dose of ethanol on cultured rat ventricular myocytes ALDH2 expression; Method using primary cultured neonatal rat ventricular myocytes, treated with different concentrations of ethanol, the use of oxygen preparation kit model of myocardial hypoxia, ethanol by flow cytometry after the intervention changes in myocardial apoptosis. Immunofluorescence detection of ALDH2 expression. Results of neonatal rat cardiac cells in primary culture for more than 90% purity by flow cytometry showed that: in the low dose range of ethanol concentration and hypoxia-induced apoptosis in cardiac myocytes showed a U-shaped relationship between. Conclusion In the low dose range, dose of ethanol and hypoxia-induced cardiomyocyte apoptosis between the U-shaped relationship. Low dose of ethanol may be increased or at least in part by ALDH2, inhibition of cardiomyocyte apoptosis play a role in myocardial protection.
【Keywords】ALDH2; myocardial cells; ethanol; apoptosis
随着人民生活水平的提高，日常生活中饮酒越来越普遍。酗酒对机体产生很大的影响，造成广泛的代谢紊乱和器官功能损伤。长时间酗酒能明显增加肝脏疾病、心脏疾病、消化性溃疡、出生缺陷和脑损伤等。另一方面，大量流行病学和临床调查显示低中剂量饮酒能够降低冠心病发病率和死亡率[1]。低中剂量乙醇能否通过影响ALDH2表达发挥心肌保护作用；未见文献报道。本文拟通过低中剂量乙醇对培养大鼠心肌细胞ALDH2的影响作用，为适量饮酒具有心肌保护作用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料 实验动物选择出生12-24小时SD大鼠20只，雌雄不限(河南大学实验动物中心提供)；胎牛血清(军事医学科学院产品)；DMEM高糖培养基和胰蛋白酶(Sigm产品)，Ⅰ型胶原酶和透明酸酶(Gibico产品)；5溴-2脱氧尿苷(5/-Bromo-2/-deoxyuridine, Brdu)
1.2 实验方法
1.2.1 心肌细胞培养和免疫荧光鉴定心肌细胞
1.2.1.1 心肌细胞培养 无菌条件下开胸取出心脏，剪去心室肌组织，将心房肌组织剪成体积约0.5mm3的小块，机械清洗，弃上清液。在沉淀组织加入0.1%胰蛋白酶、透明酸酶和0.1%胶原酶各3ml，置入37.0℃水浴箱中，用机械吹打进行消化分离5min，收集上清加入等量的含10%胎牛血清(fetal bovine serum FBS )培养液以终止消化，重复数次直到组织块消失，将上述上清收集离心(1000r/min,10min),弃去上清，加入含20%FBS 的培养液3ml制成细胞悬液，置入培养瓶中，放入培养箱(37.0℃，5%CO2)进行培养。60min后将培养瓶中的上清移入另一培养瓶，重复两次后取上清液再次离心(1000r/min,10min)，加入20%FBS 的DMEM制成细胞悬液，细胞计数，调整浓度为1x106个/L，取培养皿36个，分别放入处理过的雪盖片1个，在雪盖片上各加入上述细胞悬液0.2ml，1hr后，再各加入含20%FBS 及0.1mmol/L Brdu的DMEM高糖培养液2.5ml，充分混合后放入培养箱进行培养，备用。
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