滤白汇集血小板的制备质量控制及临床应用
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[摘要] 随着临床输血技术水平的不断提高,血小板输注用量逐年大幅递增。一方面单采血小板血源紧张,供不应求;另一方面因以往的手工浓缩血小板制备质量不稳定,白细胞混入量多,反复输注时易引起同种免疫不良反应,影响输注效果,致临床应用受阻,使采集的全血中的大量血小板资源浪费。使用全自动成分分离机及血小板型白细胞过滤器制备滤白汇集血小板研制技术的开展,使手工血小板制备质量得到显著提升,无偿献血资源得到充分利用。我站自2007年11月开始研制滤白汇集血小板并供应临床,该制品质量指标均达到单采血小板国家质量标准,临床应用效果良好。
[关键词] 滤白;汇集血小板;全自动成分分离机;白膜法;技术参数;应用
[中图分类号]R331.1+43 [文献标识码] A[文章编号]
1.材料与方法:
1.1材料:一次性四联血袋(含血小板保存袋)、血小板型白细胞过滤汇集袋(南京双威) 、Compomat G4全自动成分分离机(德国费森尤斯)、血小板振荡保存箱、CR7大容量低温离心机。
1.2方法要求:
1.2.1:使用一次性四联血袋(含血小板保存袋)采集400mL符合《全血及成分血质量要求》的血液,采血过程顺畅,400ml采集时间<6min。
1.2.2:运输过程、离心分离、保存条件22±2℃。采用白膜法制备浓缩血小板,时间要求在6小时内完成。滤白汇集在血小板保存期内完成,其质量标准符合国家单采血小板标准。
1.3分离方法及技术参数确认:
1.3.1分离方法:采用白法制备浓缩血小板。将全血首次重离心,取出后置于全自动成分分离机上,分离出定量的白膜及悬浮血小板用的血浆量,于血小板振荡保存箱内静置1小时,使白膜层充分解聚,将白膜层(含定量血浆)轻离心,分离出上层浓缩血小板,置于血小板振荡保存箱内保存备用。临床使用前将5-6袋各项检测结果合格的浓缩血小板用无菌技术连接血小板型白细胞过滤汇集袋进行白细胞过滤后汇集成1个治疗量的滤白汇集血小板。
1.3.2全自动成分分离机分离白膜层关键技术参数确认:利用全自动成分分离机独特系统操作设计,通过多个探测区域探测白膜层分界面所需高度、挤压板推进的距离(mm计)和血浆反冲量,决定血小板白膜层的分离标准容量,并使血小板白膜层分离完全彻底,分离定量标准的白膜层,可使血小板制备质量稳定性显著提高,我站采用不同白膜层取量参数,批量血液制备滤白汇集血小板进行质量对比,最后确认最佳技术参数,其结果对比如下:
离心条件均为首次全血离心力2240g, 时间15min,白膜层离心力220g,时间10min, 升速9,降速2。悬浮血小板的血浆量均为50ml±3ml,白膜取量不同分离浓缩血小板计数其含量存在差异,对比见表一统计学处理采用配对t检验:
1.3.3使用传统的方法, 用手工分离白膜层,再提取浓缩血小板,未进行白细胞过滤,按5-6袋汇集1个治疗量浓缩血小板进行质量对比。
2.结果
2.1质量检测:用血细胞计数仪按倍比稀释计数血小板含量、红细胞混入量、白细胞混入量,并用计数板镜下计数对照各项检测结果。
2.2利用全自动成分分离机及白细胞过滤器制备20个治疗量滤白汇集血小板与24个治疗量传统方法分离的浓缩血小板质量对比,结果表明,使用机器分离,经过滤白的血小板各项指标均符合国家标准,且容量相对更固定,产品质量稳定性高。见表二,统计学处理采用配对t检验:
3.临床应用:
滤白汇集血小板主要用于临床有明显出血倾向及因血小板计数≤5×109/L急需手术的患者,跟踪调查35例血小板输注患者,分别为再障、血小板减少性紫癜、肿瘤放疗、肝硬化消化道出血、创伤性大出血、脾切除术、产科大出血、感染性休克,尿毒症等。其临床输注止血疗效明显,48小时内出血症状停止,未见新出血表现(比如皮肤肤瘀点增多等)32例,仅出现3例输注无效,1例为恶性肿瘤放疗后免疫低下者输注第二次输注时无效,2例为长期反复输注血小板患者,分别在第三次、第五输注滤白汇集血小板后,出现输注无效,其余均无输血不良反应的发生。临床应用输后血小板计数见下表三,效果评价CCI值=[(输注后血小板计数-输注前血小板计数)×109×体表面积m2]÷输入的血小板总数(×1011),CCI值>10为输注有效[ 1 ],见表四:
4.讨论:
从上述质量检测报告中看出,我站制备的滤白汇集血小板的质量均可达到单采血小板国家标准,而且通过滤白后,其血小板含量均大于2.5×1011/袋,白细胞滤除率大于98% ,红细胞混入量小于8.0×109/袋,符合国家预防CMV感染和HLA同程免疫质量标准。
全自动成分分离机用于滤白汇集血小板的分离,可避免工作人员手法不一致造成的误差,使分离的产品容量更标准,血小板收集及产品质量更具稳定性,但全自动成分分离机在分离白膜量的参数设置上也同样是影响血小板收集效果的关键点之一。
血液采集的顺畅和运输保存过程至成分分离过程整个的温度控制,以避免血小板功能受损也是滤白汇集血小板的制备中应注意把握的质量控制关键点。
白膜层分离后静置在22℃保存箱,可以使血小板充分解聚,白膜层中所含血浆量应大于40ml以上,这样二次离心时可以使血小板完全悬浮在血浆上,上层浓缩血小板与下层白细胞、红细胞之间分界清晰,得到充分分离。
使用血小板白细胞过滤器, 可将血液中的白细胞滤除,防止了因白细胞输注引起的各种输血不良反应,减少因白细胞引发的移植物抗宿主病(TA-GVHD)、病毒传染性疾病等,可避免由白细胞引起的输血反应, 减弱亲细胞病毒感染,清除红细胞表面以及血浆中的免疫复合物节炎等 ......
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