胃癌中SMURF1基因表达水平的研究
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2010年11月1日
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[摘要]目的探讨胃癌中SMURF1基因表达水平的情况。方法应用real-time PCR方法检测30例胃癌组织中SMURF1基因mRNA表达水平；应用Western blot方法检测SMURF1蛋白水平的表达。结果在30例病例中，肿瘤组织SMURF1 mRNA表达高于相应癌旁正常组织的有19例，经统计分析肿瘤组与对照组差异显著(p <0.01)；21例中SMURF1蛋白表达升高(p <0.01)。结论胃癌中SMURF1基因mRNA和蛋白表达水平升高。
[关键词]胃癌; SMURF1
[中图分类号] R735.2[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-10-001-01
对胃癌起始和进展的分子基础的认识是实现其早期诊断和鉴定新的治疗靶标中的关键点。SMURF1(Smad特异性E3泛素蛋白连接酶1)是新近发现的一种肿瘤候选基因[1]，本研究鉴定了胃癌组织中SMURF1基因表达水平的异常情况，从而探讨其在胃癌发生发展中的作用。
1材料与方法
1.1标本来源30例胃癌组织标本来源于中国医科大学附属第一医院及武警辽宁省总队医院2005年～2010年病例。依据知情同意的原则，在术中进行标本采集。各例标本分别取癌巢组织及对应癌旁正常组织供提取RNA及蛋白质。
1.2Real-time RT-PCR 各例取约500mg组织标本，应用TRIzol试剂常规方法提取组织RNA。取1μg RNA，应用Promega公司反转录试剂盒随机寡聚六磷酸核苷酸引物法合成cDNA。应用相应引物进行扩增，以β-actin为内对照，应用标准曲线相对定量方法，在优化条件下进行real-time PCR扩增。
1.3Western blot取约500mg组织标本，提取组织总蛋白。上样至聚丙烯酰胺凝胶中电泳。电转印至PVDF膜，封闭2 h。加入SMURF1或β-actin抗体杂交，加入碱性磷酸酶标记的二抗杂交。显色约5 min，观察、成像。
1.4统计分析应用配对资料t检验进行统计分析。
2结 果
2.1 胃癌中SMURF1 mRNA的表达水平Real-time RT-PCR结果显示，肿瘤组的相对表达量明显高于癌旁组织(p <0.01)。在30例病例中，肿瘤组织SMURF1表达高于相应正常组织的有19例，占63%。图1 real-time PCR显示肿瘤组织SMURF1 mRNA表达高于癌旁正常组织。
图1Real-time RT-PCR结果
T：肿瘤组织；N：癌旁正常组织
2.2SMURF1蛋白在胃癌中的高表达Western blot结果显示胃癌组织中SMURF表达显著高于相应癌旁正常组织，经t检验，p <0.01。在30例标本中，肿瘤组织SMURF1蛋白表达高于相应癌旁正常组织的有21例，占70%，其中包括全部上述SMURF1 mRNA表达水平增高的19例，而另有2例mRNA表达未见明显升高，但检测到其蛋白表达水平增高。图2为Western blot结果。
图2Western印迹杂交结果
T：肿瘤组织；N：癌旁正常组织
3讨 论
蛋白质的泛素化由三种酶催化：泛素激活酶(E1)、泛素偶联酶(E2)和泛素连接酶(E3)。E3能够识别底物，决定底物的特异性。因此，E3连接酶具有高度特异性，被认为是肿瘤治疗的良好靶标[2]。
SMURF1是一种新近发现的E3泛素连接酶，主要调节SMAD家族的泛素化。SMAD家族是转化生长因子 (TGF)-β超家族信号转导通路中的重要组分[3]。TGF-β家族可通过调节多种肿瘤相关基因的表达而发挥重要的生长抑制作用，该信号通路的抑制可导致多种肿瘤，包括乳腺癌、结直肠癌和胰腺癌等[3]。研究发现，一方面，SMURF1可直接引起SMAD泛素化而使其降解；另一方面SMURF1能够通过SMAD而与TGF-β受体相互作用并使其降解[4]。因此，SMURF1可能在肿瘤的发生中具有重要的作用。
本研究选择了30例胃癌组织标本为研究对象，通过real-time RT-PCR和Western blot方法检测了SMURF1基因mRNA和蛋白表达水平，结果显示在30例胃癌中19例同时存在SMURF1 mRNA和蛋白的高表达，提示胃癌中可能存在SMURF1的表达上调，进而通过SMAD影响TGF-β信号通路，造成细胞生长失控而促进肿瘤发生发展的机制。
综上，我们的研究显示胃癌中SMURF1基因表达水平升高，提示其可能在胃癌的发生发展中发挥一定的作用 ......
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