来氟米特对胶原诱导性关节炎大鼠部分机理的研究

http://www.100md.com 2010年12月1日

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     [摘要]目的探讨来氟米特对胶原诱导性关节炎大鼠部分机理。方法建立大鼠 (CIA)模型，评检测血清抗Ⅱ型胶原抗体IgG和IgM水平、关节组织匀浆上清和血清中促炎细胞因子IL-1、TNF 以及血清炎症介质PGE2的含量变化。结果与模型组比较来氟米特明显的抑制了血清IgG、IgM水平增高，降低了关节组织和血清中IL-1、TNF 和IL-6以及血清PGE2的含量。来氟米特对于RA作用机制可能与抑制促炎细胞因子和炎症介质的产生有关。

    [关键词]来氟米特； 胶原诱导性关节炎； 作用机制

    [中图分类号] R965.1 [文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-12-173-01

    来氟米特属于异凹唑类药物，是一种新的免疫抑制剂。临床研究发现，其对于类风湿关节炎的治疗是安全有效的，对于改善RA的临床症状与甲氨喋呤、硫氮磺胺吡啶作用相似，减轻软骨侵蚀和骨质破坏，有效的改善症状，阻止病情的发展，不良反应减少[1]。本文对来氟米特治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)大鼠进行了研究，并对部分作用机制进行了探讨。

    1 材料

    1.1动物健康雄性Wistar大鼠，清洁级，体重170±10g。

    1.2药品及试剂来氟米特(福建汇天生物药业有限公司)。牛Ⅱ型胶原(CII)购于chondrex；完全弗氏佐剂(CFA)购于Difco公司；IL-1、TNFα和PGE2放射免疫分析法(RIA)测定试剂盒，PGE2酶联免疫吸附法检测试剂盒；Rabbit Anti-RatIgM (bsb-0346R)、Rabbit Anti-RatIgG (bsb-0293R)、strep tavidin/HRP(bsb-0437R)，北京博奥森生物技术有限公司产品。

    1.3 仪器GC911放射免疫γ计数器；Multiskan Ascent酶标仪(芬兰Labsystems公司)。

    2 方法

    2.1 造模及给药将大鼠随机分为3组，正常组、模型组、治疗组，每组12只。除正常组外，其余2组按文献方法[2]制备CIA模型，具体方法为：取适量牛Ⅱ型胶原乳化剂，溶于0.1 mol?L-1醋酸(4℃过夜)，加入完全弗氏佐剂(CFA)，混悬乳剂充分乳化，以滴入水中呈珠状为度，取适量配好的乳剂，每只大鼠以0.1ml(含100μgCⅡ)于尾根部皮下散点注射。第7天等量乳化剂激发免疫。于第二次免疫后开始灌胃给药，25 mg·kg-1，连续4w。同时，正常组和模型组灌服等容积蒸馏水。

    2.2 取材及组织处理免疫后第35天大鼠眼球后静脉丛取血，4℃离心，取血清-20℃保存待用；取左后踝关节去皮、液氮冷冻后进行组织匀浆，取上清-20℃保存待用。

    2.3 血清抗CII抗体IgG、IgM含量参考文献[2]采用酶联免疫吸附法检测；促炎细胞因子和炎症介质含量，放射免疫分析法检测血清和关节组织匀浆上清中促炎细胞因子IL-1、TNFα的含量，酶联免疫吸附技术检测血清PGE2的含量，具体操作按试剂盒的说明书进行。

    2.4 统计方法软件用SPSS13.0，采用多因素方差分析。实验结果以(x±s)表示。

    3 结果

    3.1 来氟米特对CIA大鼠抗CII抗体含量的影响。见表1

    表1来氟米特对CIA大鼠血清抗CII抗体

    IgG、IgM含量的影响(x±s，n=12)

    注：模型与正常组比较:# P<0.05， ## P<0.01; 治疗组与模型组比较：** P<0.01，*** P<0.001

    3.2 来氟米特对CIA大鼠血清和关节组织促炎细胞因子和血清炎症介质的影响。见表2

    4讨论

    现代医学研究表明，RA的关节损伤是由滑膜所介导。感染或创伤等外来刺激，启动了自身免疫反应，使滑膜细胞迅速增殖，嗜中性粒细胞、T细胞、单核巨噬细胞等各种炎症细胞对滑膜的浸润加强，同时分泌产生大量细胞因子(如IL-1，TNF-a等)、各种抗体(IgG、IgM-RF等)和炎症介质(PGE2等)，联合介导了RA炎症组织损伤。其中，前列腺素E2(PGE2)是RA发生发展过程中重要的炎性介质之一，细胞因子如白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等是引起类风湿关节炎炎症与关节损伤的重要介质，细胞因子可能通过介导细胞与细胞之间的相互作用与炎症的迁延，滑膜细胞的活化、增殖及骨损害有关，甚至可导致难治性或恶性RA[3]。

    本实验的研究结果显示，来氟米特能降低CIA大鼠血清中IgG和IgM含量，抑制机体对CII的体液免疫反应，从而有效地控制CII免疫对关节的破坏作用 ......

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