探讨如何在医院建立多种制剂的微生物检测方法
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[摘要] 目的 建立多种医院制剂的微生物限度检测方法。方法 使用常规法测定各品种对5个规定试验菌株的回收率，并对必检控制菌的检查法进行验证。结果 口咽合剂有抑茵作用，润燥通便合剂无抑茵作用。结论 润燥通便合剂用常规法检查微生物限度，口咽合剂可以使用离心沉淀集菌法和培养基稀释法联用的这两种方法进行检查。
[关键词] 微生物限度检查法； 口咽合剂； 润燥通便合剂； 医院制剂
[中图分类号] R446[文献标识码]B [文章编号] 1005-0515(2011)-07-313-01
根据在《中国药典》2005版中规定，药品在进行微生物限度检查前必须对其检查方法进行验证，以确定供试品所采用的检验方法无抑菌作用，能够真实的反应供试品受污染程度。通过对口咽合剂及润燥通便合剂建立了相应的微生物限度检查方法，根据制剂的成分的抑菌作用，采用常规法和离心集菌法和培养基稀释法联用这两种方法进行检查；经方法验证试验证实能够真实反映供试品的卫生学情况。
1 一般资料和方法 仪器：YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器(博迅实业有限公司药疗设备厂)，HH:$21.CR4恒温水浴锅(汕头广播仪器厂)，TL04A均浆仪(大恒建海科贸公司)，LRH-150B生化培养箱(广东省药疗器件厂)，JKOP-420电热恒温培养箱(厦门医疗电子仪器厂)，BP211D电子天平(上海精密仪器有限公司)，KA-10型台式离心机(安亭科学仪器厂)。
试药和培养基:氯化钠为分析纯(批号:090519)，营养脂培养基(批号:080708)，玫瑰红钠脂培养基(批号:080610)，胆盐乳糖培养基(批号:080321)，营养肉汤培养基(批号:080527)，pH7.0氯化钠一蛋白胨缓冲液(批号:080621)，改良马丁培养基(批号:080316)，以上培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
试验菌种:大肠埃希菌CMCC(B44102，金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501，白色念珠球菌CMCC(F)98001，黑曲霉菌CMCC(F)98003，均来自国家菌种保藏中心。
2 结果 供试液的制备：取3批供试品各10m1，分别加pH=7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100ml，置电动均浆仪中均浆1分钟，制成1:l0的供试液。
试验组A：①细菌记数采用常规法，取1:10的供试液1ml置平皿，每个平皿加试验菌液1ml，加入营养琼脂培养基15-20ml；每个试验菌平行制备2个平皿，放冷倒置平皿，在30-35℃培养48小时，观测结果。霉菌和酵母菌记数采用常规方法。取1:10的供试液1ml，置平皿中，每个平皿加试验菌液1ml，加玫瑰红钠琼脂培养基15-20ml，每种试验菌平行制备2个平皿，放冷倒置，于25℃培养72小时，测定菌落数。②离心沉淀集菌法和培养基稀释法联用取“2.1'’制备的供试液40ml，分别分在4支离心管中，用r/分离心5分钟，取各管上层液，再用3000r/分，20分钟，弃去上清液，留下层沉淀2ml注入一个平皿中迅速倒人15-20ml试液，培养时间与常规范相同。
菌液组B：分别取50-100ml，cfu/ml的试验菌液1ml，注入平皿中，立即倒入培养基，平行制备2个平皿，置30℃-35℃培养48-72小时，观察结果，测定菌数。
供试品对照组C:按2005年版《中国药典一部》微生物限度菌落计数方法测定本品的本底数(按试验组的方法，不加菌悬液测定供试品菌数)。
稀释剂对照组D:取pH=7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液1ml，方法同实验组(中国药典规定凡是使用离心沉淀法，中和法，薄膜过滤法等需要做稀释剂对照组)。
菌回收率计算及结果判断：2005版药典规定对各试验菌株的回收率均不得低于70%。用常规法测定该两个品种对5个试验菌株的回收率，以确定其抑菌程度。润燥通便合剂对各试验菌株的回收率均高于70%，无明显抑菌作用；而口咽合剂对枯草芽胞菌有抑菌作用。 见表1。
口咽合剂采用离心沉淀集菌法和培养基稀释法联用的方法：采用采用离心沉淀集菌法和培养基稀释法联用的方法可有效的除去该药对试验菌株的抑菌作用，使回收率大于70%。见表2。
表二 采用离心淀集均法和培养基稀释法(0.2%ml)
联用测定枯草芽孢菌的回收率(%)
控制菌检验法的验证：大肠埃希菌检查法的验证，常规法：①试验组：取上述供试品溶液10ml及大肠埃希菌菌液1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，于35～37qC培养24小时。②阴性菌对照组：取上述供试品溶液10ml及金黄色葡萄球菌菌液1ml(含菌量10～100cfu)加入100ml胆盐乳糖培养基中，培养。
取上述培养物0.2ml，接种于含5mlMUG培养基的试管中，培养，于24小时在365nm紫外线观察，同时做本底对照。观察后，沿培养管管壁加入数滴靛基质试液，观察，结果2个品种均为实验组检出，阴性组未检出。
大肠菌群检查法的验证，常规法：①实验组：取10ml的胆盐乳糖发酵培养基1支，加入1：10ml的供试液和大肠埃希菌菌液各1ml(含菌量10-100cfu)，于35-37℃培养24小时。
阴性菌对照组：取取10ml的胆盐乳糖发酵培养基1支，加入1：10ml的供试液和金黄色葡萄球菌菌液各lml(含菌量10-100cfu)，于35-37qC培养24小时。
结果显示，两个品种均为试验组检出，阴性组未检出。
3 讨论 润燥通便合剂：采用常规法记数，口咽合剂采用离心沉淀集菌法和稀释剂法联用这两种方法 ......
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