糖尿康片质量标准研究
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[摘要] 目的 建立糖尿康片的质量标准。方法 采用TLC法对处方中主要药物黄芪、苍术、黄连进行定性鉴别；并用HPLC法对处方中黄连中所含的盐酸小檗碱进行含量测定，色谱柱:DiarnonsilTM Cl8，流动相:0.033mol/L磷酸二氢钾溶液一乙腈(70:30)，流速：1.0mL/min，检测波长为265nm。结果 主要药物黄芪、苍术、黄连的薄层色谱斑点清晰，易于识别，专属性强；盐酸小檗碱在0.2376-0.5544μg范围内的线性关系良好。(r=0.9999)；平均回收率为100.6%，RSD＝1.31%。结论 该方法准确灵敏，简便，专属性强，重复性好，提高后的质量标准能更有效的控制该制剂的质量。
[关键词] 糖尿康片； 质量标准； TCL； HPLC
[中图分类号] R587.1[文献标识码] B[文章编号] 1005-0515(2011)-08-001-02
糖尿康片是由黄芪、地黄、苍术、玄参、黄连、鬼箭羽组成。具有益气养阴，降糖止渴之功。用于阴虚型Ⅱ型糖尿病，是开封市中医院获得河南省食品药品监督管理局制剂批文的院内制剂(豫药制字Z04020167)。临床疗效确切，年销售4万多瓶，110多万元。以其所立的糖尿康片干预糖调节受损的临床观察曾获2007年开封市科学进步一等奖、以其所立的糖尿康片干预空腹血糖受损的临床研究曾获2010年河南省中医药科学技术成果一等奖。由于受当时条件所限，其制剂工艺和质量标准都存在一定的缺陷和不足，尤其是原质量标准缺少其主要药物的薄层鉴别和含量测定项，不能满足药监部门对其的质量控制要求。为了有效控制其质量，保证其临床安全有效，提高其质量标准，参照2010版《中国药典》(一部)对方中主要药物黄芪、苍术、黄连拟定了薄层鉴别，同时用高效液相色谱法对黄连中所含的盐酸小檗碱进行含量测定，以此为该制剂提供质量控制依据。
1 材料、仪器与试剂
1.1 实验药材及对照品 糖尿康片，根据省局制剂批文上的处方由开封市中医院制剂室自制，批号090601、100317、101126。黄芪甲苷对照品：(110766-200816)，苍术素对照品(110766- 200816)，盐酸小檗碱对照品(10766-200816)，苍术对照药材(110737-200812)，以上对照品及对照药材均购买自中国药品生物制品检定所。
1.2 实验仪器与试剂 岛津高效液相色谱仪，包括岛津LC-10Atvp泵、SPD-10Avp型紫外检测器CTO-10A vp型柱温箱及CBM-2Avp型色谱工作站，均为岛津仪器(苏州)有限公司制造。AS3120A超声清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司生产)。薄层层析展开槽，开封百纺化玻有限公司提供。硅胶G薄层板购自青岛海洋化工集团公司。甲醇(一级色谱醇)天津市四友精细化学品有限公司生产批号20100328。其余试剂均为分析纯，为天津化学试剂六厂产品。
2 质量标准
2.1 薄层鉴别
2.1.1 黄芪的TCL鉴别 取本品30片，研细，加2%氢氧化钾甲醇溶液50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用1%氢氧化钠溶液30ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液2-5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.1.2 苍术的TCL鉴别 取本品15片，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取苍术对照药材0.8g，同法制成对照药材溶液。再取苍术素对照品加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各6μl,对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-丙酮(9:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
2.1.3 黄连的TCL鉴别 取本品2片，研细，加乙醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:7:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统性实验 色谱柱:DiarnonsilTMCl8，流动相:0.033mol/L磷酸二氢钾溶液一乙腈(70:30)，流速:1.0mL/min，检测波长为265nm,柱温25℃,进样量10μl,理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
3.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品9.90mg，置50ml量瓶中，加盐酸·甲醇溶液(1:99)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
3.3 供试品溶液的制备 取样品10片，研细，过三号筛，精密称定0.4g,精密加入盐酸-甲醇溶液(1:99)25ml，精密称定重量，60℃水浴中加热15min，取出，加热(50-60℃)超声处理30min,室温放置过夜，精密称定重量，用盐酸一甲醇溶液(1:99)补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以峰面积按外标法计算。
3.5 线性关系考察 精密量取对照品贮备液0.6，0.8，1.0，1.2，1.4ml，分别置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度(浓度分别为11.88，15.84，19.80，23.76，27.72μg/ml)，按上述色谱条件进样，进样量分别为0.2376，0.3168，0.3960，0.4752，0.5544μg。以盐酸小檗碱的进样量C(μg)对峰面A进行线性回归(n=5)，得回归方程:A=4.3274×107C-1.7453×105,r=0.9999。结果表明:盐酸小檗碱在0.2376-0.5544μg范围内的线性关系良好。
3.6 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.60%(n=5)，表明精密度良好。 ......
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