锌对酒精性损伤小鼠睾丸组织酶影响的实验研究
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[摘要] 目的 通过实验，研究锌对酒精性睾丸损伤小鼠的保护作用。方法 采用紫外光度法对小鼠睾丸组织琥珀酸脱氢酶和丙二醛进行检测。结果 锌低剂量组和锌高剂量组琥珀酸脱氢酶含量高于空白对照组和白酒对照组；空白对照组、锌低剂量组、锌中剂量组和锌高剂量组丙二醛含量低于白酒对照组。并且低剂量的锌对琥珀酸脱氢酶作用更明显，高剂量的锌对丙二醛的作用更明显。结论 锌有效地保护酒精对小鼠的睾丸损伤。
[关键词] 锌； 睾丸； 酒精； 丙二醛； 琥珀酸脱氢酶
[中图分类号] R-33[文献标识码] B[文章编号] 1005-0515(2011)-11-022-01
锌是生物体内的重要的微量元素之一，1940年，Keilin和Mann从哺乳动物的红细胞里分离出碳酸酐酶，并测出其含0.33%的锌，由此确定了锌是维持该酶活性所必需[1]。在生物体内，锌参与多种代谢过程，包括糖类、脂类、蛋白质与核酸的合成与降解，这些多与含锌酶的广泛存在有关[2]。锌与机体发育、骨骼生长、免疫、性发育、蛋白质和核酸代谢、酶的活性密切相关。因此，锌被誉为生命之素[3]。
1 对象与方法
1.1 研究对象 昆明种小鼠，均为雄性，体重18-24g，由内蒙古大学实验动物中心提供，为清洁级动物。
1.2 仪器及试剂 721分光光度计，TG328A电光分析天平，TGL-16B高速台式离心机，葡萄糖酸锌(北京高科药物有限责任公司)，丙二醛检测试剂盒、琥珀酸脱氢酶检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3 研究方法 本研究采用动物实验的方法进行；资料统计采用SPSS11.5统计软件分析。
1.3.1 动物分组及处理 将50只健康昆明种小鼠(均为雄性)随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组，白酒对照组，锌低、中、高三个剂量组，含锌剂量分别为1.25mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg。其中空白对照组和白酒对照组饮用自来水，其他各组分别饮用自由溶于水的葡萄糖酸锌溶液。各组大鼠均采用自由饮用的方式，连续饮用30天。在实验期间，每周称一次体重，观察小鼠的一般状况。第30天时对小鼠进行空腹白酒灌胃实验。实验时采用一次大剂量白酒灌胃的方法，按12ml/kg.bw剂量灌胃各组小鼠，16小时后处死小鼠，取小鼠睾丸组织测定各项指标。
1.3.2 睾丸组织匀浆的制备 处死小鼠后立即打开腹腔取出睾丸组织，在冰盘上用冷生理盐水冲洗除去血液，滤纸拭干，放在小烧杯中加入冷生理盐水，然后用小剪刀尽快剪碎组织，放入玻璃匀浆管，补足冷生理盐水制成组织匀浆。组织匀浆用低温离心机离心10分钟(2500rpm)，取适量上清液进行琥珀酸脱氢酶、丙二醛的测定。
2 结果
2.1 小鼠睾丸组织琥珀酸脱氢酶检测情况 锌低剂量组、锌高剂量组与白酒对照组比较，结果有统计学差异(p<0.05)；锌低剂量组与空白对照组比较，结果有统计学差异(p<0.05)。提示补充锌元素对酒精损伤睾丸的琥珀酸脱氢酶的升高有一定的作用，并且低剂量的锌作用更加明显。结果见表1。
表1锌对小鼠睾丸组织琥珀酸脱氢酶检测结果
注：*与白酒对照组比较，p<0.05，#与空白对照组比较，p<0.05。
2.2 小鼠睾丸组织丙二醛检测情况 空白对照组、锌低剂量组、锌中剂量组和锌高剂量组与白酒对照组比较，结果有统计学差异(p<0.05)；白酒对照组、锌高剂量组与空白计量组比较，结果有统计学差异(p<0.05)。提示补充锌元素对酒精损伤睾丸的丙二醛的降低有一定的作用，并且高剂量的锌作用更加明显。结果见表2。
表2锌对小鼠睾丸组织丙二醛检测结果
注：*与白酒对照组比较，p<0.05，#与空白对照组比较，p<0.05。
3 讨论 目前关于男性生殖方面的研究已受到广泛关注，有学者对重金属、细胞毒药物及免疫抑制剂、生殖激素等对精子发生的影响做了深入的研究[4-5]，大量临床观察和流行病学调查证实男性酗酒可影响身体健康并引起后代发育异常[6]，男性酗酒可使性功能减退并引起后代发育和行为异常[7]。
琥珀酸脱氢酶(SDH)，是线粒体内膜的结合酶，为线粒体的一种标志酶。作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶之一，其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标，对于评价精子线粒体功能等具有重要意义。丙二醛(MDA)是氧自由基与生物膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，与氧自由基的量一致，由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。脂质氧化终产物丙二醛在体外影响线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性。
酒精及其代谢物乙醛可以在体内产生自由基，自由基攻击膜上的不饱和脂肪酸即可诱发脂质过氧化，而睾丸线粒体膜、精子均富含不饱和脂肪酸，易受过氧化攻击，进而影响精子功能。生物组织中丙二醛形成是不饱和脂肪酸过氧化分解的结果，通过测定丙二醛能有效判断脂质过氧化程度。Grattagliano等[8]研究亦表明长期摄入乙醇引起睾丸丙二醛增多、还原型谷胱甘肽降低。酒精中毒者有不同程度的睾丸萎缩。组织学上表现为支持细胞萎缩、生精细胞减少，同时还有精子形态的改变，如头端破裂、中段膨胀和尾部卷曲等。
本研究显示，在小鼠进行补锌后，可提高琥珀酸脱氢酶的浓度，并降低丙二醛的含量，使得酒精对小鼠睾丸的损伤降低，起到一定的保护作用；根据对小鼠补锌的不同剂量，可以从研究中得出低剂量的锌对琥珀酸脱氢酶的提高作用更明显，高剂量的锌对丙二醛的降低作用更明显。因此，在选择补充微量元素锌的时候，可以为其保护的器官不同提供一定的剂量探索。
参考文献
[1] 李道荣,段素华.人体中锌的生物学功能[J].生命的化学,1997,17(1):27-31.
[2] 王志武,孙建钢等.微量元素锌的生物学功能及其应用进展[J].饲料研究,2005,8:12-16.
[3] 周毅峰,吴永尧等.锌的生物学功能[J].氨基酸和生物资源,2004,26(2):11-15.
[4] 晓岗,李维信.镉对大鼠睾丸间质细胞损伤及锌对其保护的形态学研究[J] ......
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