鲎试剂法检测岩黄连注射液中的细菌内毒素
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[摘要] 目的 探讨岩黄连注射液细菌内毒素的检测方法。方法 用一个厂家两个批号的鲎试剂对四批样品进行干扰试验。结果 对样品进行600倍稀释，用0.25Eu.ml-1鲎试剂进行试验可消除干扰。结论 鲎试剂法可以检测岩黄连注射液中的细菌内毒素。
[关键词] 岩黄连注射液； 鲎试剂； 细菌内毒素检查
[中图分类号] R194[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515(2011)-11-034-01
岩黄连注射液系用罂粟科紫堇属植物石生黄堇(Corydalis Saxicola Bucting)经提取其有效生物碱而制成的灭菌水溶液。每支含岩黄连碱0.7mg。是东兰制药厂自行研制而成，全国独家独创产品，纯中药制剂。本品为橙黄色至棕褐色澄明液体，临床用于急慢性肝炎属肝胆湿热证者。根据细菌内毒素检查法具有灵敏度高、快速、准确、操作简便等优点，本文按《中国药典》2005年版二部附录的细菌内毒素检查法及其应用指导原则，研究了岩黄连注射液对细菌内毒素检查试验的干扰情况，建立岩黄连注射液细菌内毒素检查方法，以适应目前国内外药典中普遍增加对类似小针剂中内毒素检查的质量要求，确保临床用药安全。现将具体方法介绍如下：
1 实验材料
1.1 鲎试剂 批号0702140，λ=0.25Eu.ml-1,0.1ml支-1，湛江博康海洋生物有限公司；批号0809040，λ=0.25Eu.ml-1，0.1ml支-1，湛江博康海洋生物制品厂。
1.2 细菌内毒素工作标准品 1402-2007-3，150Eu.ml-1，中国药品生物制品检定所。
1.3 细菌内毒素检查用水 W98-1，10ml.支-1，中国药品生物制品检定所。
1.4 仪器 旋涡混合器XW-80A，上海医科大学仪器厂；电热恒温水浴锅，HH.SY11-Nil，天津市中环实验电炉有限公司。
1.5 岩黄连注射液 批号：090211、090303、090402、090701，2ml.支-1，广西河丰药业有限责任公司。
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进行[1]，结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果
经复核，鲎试剂的灵敏度λc均在0.5λ-2.0λ之间，表明两个厂家两批鲎试剂灵敏度标示均符合规定，可用于试验。
2.2 细菌内毒素限值的确定[2-3] 细菌内毒素限值L=K/M，式中K为按规定的给药途径，成人每公斤体重每小时可以接受的不产生任何不良反应的最大细菌内毒素剂量(5Eu/Kg.h)；M是按规定的给药途径，成人每公斤体重每小时给药的最大剂量，由于岩黄连注射液在临床上成人最大用量为2ml，人均体重按60kg计算，给药时间按1h计算，因此确定：L=K/M=5/[2/(60×1)]=150 Eu.ml-1。
2.3 最大有效稀释倍数(MVD)的确定[4] 拟选用0.25Eu.ml-1灵敏度的鲎试剂，据MVD=C.L/λ，计算得供试品的有效稀释倍数为600倍，因此以供试品600倍稀释液进行干扰试验。
2.4 供试品干扰预试验 用细菌内毒素检查用水和1:11稀释液将同一支细菌内毒素标准品分别制成2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的系列浓度，用湛江博康海洋生物制品厂一个厂家两个批号规格为λ=0.25 Eu.ml-1的鲎试剂考察批号为090211的供试品在600倍稀释浓度下干扰情况，每一浓度做2管，同时做阴性对照和标准对照，结果见表2。
表2岩黄连注射液细菌内毒素干扰预试验结果
由表2可知，Es在0.5λ-2.0λ,Et在0.5Es-2.0Es范围内，提示090211批号供试品在600倍稀释液浓度下对试验没有干扰作用。
2.5 供试品干扰试验 用细菌内毒素检查用水和600倍稀释液将同一支细菌内毒素工件标准品分别制成2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的系列浓度，分别用一个厂家两个批号规格为λ=0.25Eu.ml-1的鲎试剂考察3批供试品在600倍稀释液浓度下的干扰情况，每一浓度做4管，同时做阴性对照和标准对照。结果表明：3批供试品在600倍稀释液浓度下对试验无干扰作用，结果见表3。
表3细辛脑注射液细菌内毒素干扰试验结果
结果表明：3批供试品在600倍稀释液浓度下对试验无干扰作用。
2.6 供试品检查试验 取4批岩黄连注射液，按《中国药典》2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法分别用一个厂家两个批号的鲎试剂考察其在600倍稀释液下内毒素限值，结果符合中国药典对其有效性的规定，结果见表4。
表4岩黄连注射液细菌内毒素检查试验结果
3 讨论 细菌内毒素检查法是通过鲎试剂与细菌内毒素在体外起凝胶反应的机理而完成的 ......
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