丙型病毒性肝炎患者基因分型与干扰素治疗疗效关系的临床研究
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[摘要] 目的 为了解湘南地区丙型肝炎病毒的基因型和基因型对干扰素疗效的预示价值，探讨丙型肝炎病毒基因型与干扰素疗效的关系。方法 100例慢性丙型肝炎(HCV)患者，RFLP分析进行HCV基因分型，HCV RNA采用荧光定量PCR试剂盒，32例慢性丙型肝炎患者采用IFN-alb治疗，疗程52周。全自动生化分析仪检测血清。结果 100例抗HCV阳性患者HCV RNA检出率82.00%(82/100)，HCVI型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅱ+Ⅲ型分别为0、29.27%、62.20%、0、8.54%。干扰素治疗病例中，HCVⅡ型、Ⅲ型、Ⅱ+Ⅲ型感染的应答率分别为42.86%、77.17%、66.67%，有显著性差异(P<0.05)。HCV基因型与血清ALT无相关性。结论 湘南地区HCV感染以Ⅱ、Ⅲ型感染为主，干扰素对HCV Ⅲ型感染的疗效优于HCVⅡ型，ALT与HCV RNA水平可作为干扰素疗效的参考指标，HCV基因分型有预测干扰素疗效的意义。
[关键词] 肝炎病毒； 基因分型； 干扰素； 疗效
[中图分类号] R512.6+3 [文献标识码] B [文章编号] 1005-0515(2012)-01-113-01
因为丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白区E2基因5’端编码的21个氨基酸的第一高变区(HVRI)变异率高，所以丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布随地区而异，因此HCV基因型具有重要临床意义,同时HCV基因型与疾病严重性、治疗应答、感染转归等密切相关。我们应用限制性内切酶技术(RFLP)对湘南地区100例慢性丙型肝炎(HCV)患者进行基因分型，并对32例不同基因型患者对干扰素治疗疗效的相关性进行了分析，报告如下:
1 材料和方法
1.1 研究对象 2007年6月-2009年4月间，在我院住院及门诊HCV病人100例，其中男67例，女33例；年龄8-72岁。血清抗-HCV阳性，6例合并慢性HBV感染。诊断符合2000年西安会议标准。
1.2 方法
1.2.1 抗HCV检测 试剂由上海科华公司提供，按说明书操作。
1.2.2 HCV RNA检测及基因分型 试剂由深圳匹基公司制备，RT-PCR引物取自HC\r5’非编码区，由北京Cybersyr公司合成。正向外引物CTGT-GAAAAACTACTGTCTT；反向外引物AACA.GAACTC GGGTAGGAGT；正向内引物TTCACGCA.GAAAGCGTCTAG；反向内弓l物GTTGATCCAA-GAAAGGACCC。PCR产物145bp。限制性片段长度多态性(RFLP)分析进行HCV基因分型,取第2次PCR产物，用乙醇沉淀，加10μlTE缓冲液溶解，以限制性内切酶HaeⅢ37℃消化，取消化产物用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，EB染色后于紫外光灯下检查，根据酶切产物片段长度判断基因型，HCVⅠ组(Ⅰ、Ⅱ型)不为酶切，在紫外光下见一条145bp的基因条带，而HCVⅡ组(Ⅲ、Ⅳ型)被酶切成89bp和56bp两条基因片段。如出现145bp，89bp和56bp三条基因片段为HCVⅠ/Ⅱ组混合感染。
1.2.3 HCV病人的干扰素治疗 32例HCV患者接受IFN-alb治疗，50ug/次，1次/日，肌注。4周后隔日1次，疗程62周。每月复查1次血清HCV RNA和ALT，治疗结束后随访l2-24个月，随访期间每3个月检测血ALT和HCV RNA。
1.2.4 血清ALT检测 用日本Olympus2700全自动生化分析仪检测。
1.3 数据处理采用SPsS8.0统计软件处理数据 差异的显著性用x检验。
2 结果 100例抗HCV阳性患者HCV RNA阳性82例(HCV RNA>103copies/m1)，检出率82.O0%。基因型为：HCVⅡ型29.2 7%(24/82)，HCVⅢ型62.20%(51/82)，HCVⅡ型和Ⅲ型混合感染8.54%(7/82)，未检出HCVⅠ型和Ⅳ型。各基因型感染者在年龄、性别、输血史等方面未见明显差异(P>0.05)。HCV基因型与血清ALT水平无相关性。32例接受IFN-alb治疗的慢性丙型肝炎患者基因型与应答情况见表1。以干扰素治疗52周时血清ALT正常，HCV RNA阴转定为有应答，疗效持续至治疗结束后12月或12月以上为持续应答，治疗结束时ALT无明显下降、HCV RNA仍为阳性者为无应答。
表1 32例慢性丙型肝炎患者基因型与应答情况
*Ⅱ型、Ⅱ+Ⅲ型应答率分别与Ⅲ型比较有显著性差异(P<0.5)。
3 讨论 HCV 基因分型与命名尚未统一，目前国内常用Okamoto命名系统分为Ⅰ-Ⅳ型，我们对湘南100例慢性丙型肝炎(HCV)分型，结果显示：Ⅲ型感染占大多数(62.20%),Ⅱ型和Ⅱ+Ⅲ型分别为29.27%、8.54%,未检出I型和Ⅳ型。本文观察到在临床背景相似的情况下，HCVⅢ型对干扰素治疗的反应明显高于Ⅱ型感染者，提示HCVⅢ型感染患者对IFN-alb的应答率和持续应性较Ⅱ型敏感。HCV基因型的测定有助于预示干扰素疗效。此外，研究未发现HCV基因型与年龄、性别和传播途径有相关性。
我们的研究结果当地丙型肝炎患者的治疗和预后判断有一定的指导意义。本研究的不足之处在于：样本例数较小，研究对象以慢性肝病为主，缺乏无症状患者及重型肝病患者，有必要扩大样本量，选择人群资料进一步研究 ......
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