粗壮女贞提取物遗传毒性试验研究
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[摘要] 目的 了解粗壮女贞提取物遗传毒性，为粗壮女贞的食用、药用安全性提供实验依据。方法 通过Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验对其遗传毒性进行评价。结果 粗壮女贞提取物3项遗传毒性试验结果均为阴性，对所试菌株、小鼠体细胞与雄性生殖细胞无诱变性。结论 在本实验条件下，粗壮女贞提取物未见遗传毒性作用。
[关键词] 粗壮女贞提取物； Ames试验； 微核试验； 精子畸形试验
[中图分类号] R394.6 [文献标识码] B [文章编号] 1005-0515(2012)-01-049-01
粗壮女贞被用于食品和保健食品，深受广大消费者的欢迎。本文报导其对小鼠遗传毒性试验研究结果。
1 实验材料
1.1 受试药物 粗壮女贞，采购自四川筠连县青山绿水茶叶专业合作社，其提取物性状为棕黄色液体(每毫升相当于药材2.0g)，由本试验组人员配制。
1.2 实验动物 KM小鼠90只，体重19-22g，雌雄各半；由广西医科大学实验动物中心提供，生产许可证SCXK2009-0003，动物质量合格证0009925。
2 实验方法与结果[1-2]
2.1 Ames试验 采用标准试菌株TA97、TA98、TA100、TA102，在加和不加S-9混合液的条件下，用样品五个剂量组即5000、2500、1000、500及100μg进行平板掺入法试验。同时设自发回变对照组及阳性对照组。样品、阳性对照物敌克松(Dexon 50μg/皿)、甲基磺酸甲酯(MMS 1μL/皿)、2-氨基芴(2-AF 10μg/皿)、1,8-二羟基蒽醌(1,8-Dan 50μg/皿)均用二甲基亚砜(DMSO)溶解。每剂量平行做3皿，试验重复一次。结果样品各剂量组平均回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，结果见表1：
2.2 小骨髓微核试验 将60只小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组(环磷酰胺40 mg/㎏体质量ip)、样品三个剂量组(20.0、10.0、5.0g药材/㎏体质量)，每组雌雄各5只。各组均用30h 2次灌胃法，每次0.2 mL/10g体质量。第二次灌胃后6h处死动物，取股骨骨髓悬于小牛血清中直接涂片，固定，染色，镜检。每鼠计数1 000个嗜多染红细胞的微核细胞数，计算微核发生率，结果用SPSS10.0统计软件中泊松分布u检验进行统计学分析。结果样品各剂量组的细胞微核发生率与阴性对照比较均无统计意义(P>0.05)，阳性对照组微核发生率明显高于对照组，有统计意义(P<0.001)，结果见表2：
表2 粗壮女贞提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率的影响(x±s)
注：*与阴性对照组比较，P<0.01。
2.3 小鼠精子畸形试验 将30只小鼠随机分为样品3个计量组(20.0、10.0、5.0g药材/㎏体质量)、阴性对照组、阳性对昭组(环磷酰胺40mg/㎏体质量,ip)，每组5只，各组动物每天灌胃一次，每次0.2mL/10g 体质量，连续5d。首次给受试物后的第35 d处死动物，取双侧附睾放入生理盐水中纵向切1-2刀，过滤，吸滤液涂片、固定、2%伊红染色制片。每鼠镜检1000个精子，计数精子畸形数及畸形类型，计算畸形率。结果用SPSS10.0统计软件中秩和检验统计分析。结果样品各剂量组与阳性对照组的精子畸形率比较均无统计意义(P>0.05)。阳性对照组精子畸形数明显高于阴性阴对照组，有统计意义(P<0.01)，结果见表3：
表3 粗壮女贞提取物小鼠精子畸形试验结果(x±s) ......
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