七叶亭对体外培养关节软骨细胞增殖的影响
参见附件(12kb)。
(武警四川总队医院 614000)
【摘要】方法：本研究通过MTT法观察七叶亭对体外培养关节软骨细胞增殖的影响。设立A组：阴性对照组(空白对照组),B组：阳性对照组(40ug/ml),C组：阳性对照组(80ug/ml)。结果：40ug/ml组，80ug/ml组从48小时后测得的OD值比空白对照组的OD值均高，且差异有显著性(P<0.05)；其中以80ug/ml组的对关节软骨细胞增殖最为显著，尤其在第4d、第8d时尤为明显，OD值分别比空白对照组高26.38%和22.53%。结论：本实验结果显示七叶亭能促进软骨细胞的增殖，以80ug/ml组最为明显。
【关键词】七叶亭;关节软骨; 细胞增殖
【中图分类号】R216.89【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)09-0258-02
1 材料和方法
1.1 实验材料：(1)实验动物：三周龄新西兰大耳白幼兔，雌性，三只，体重为180士10g。(2)实验药物：含七叶亭细胞培养液，浓度分别为40ug/ml，80ug/ml；甲苯胺蓝作为染色观察剂。
1.2 实验方法：取三周龄雌性健康新西兰幼兔三只，空气注射致死，75%乙醇中浸泡三分钟消毒,无菌条件下切取股骨头及股骨骼部关节面软骨,软骨细胞的分离参考王跃l的方法。软骨细胞融合约90%左右时开始传代，软骨细胞培养采用消化法。将分离培养的软骨细胞随机分为三组，分别放入不同浓度的七叶亭细胞培养液中：A组：阴性对照组(空白对照组)；B组：阳性对照组(40ug/ml)；C组：阳性对照组(80ug/ml)。
用MTT法测定软骨细胞增殖，每日同时间在上述细胞培养板中加入5mg/m1的MTT15ul，于37℃饱和湿度培养箱内继续培养4h，弃去培养液，加入DMSO150ul充分混匀后，用酶标仪在57Onm波长处读取OD值。连续测量8天。软骨细胞培养一周后，吸弃培养板内的培养液，将细胞玻片置于甲苯胺蓝染色液中染色5分钟，流水冲洗1分钟后，用蒸馏水冲洗1分钟，依次置于95%酒精(2次)及无水酒精中梯度脱水，每次3分钟，二甲苯透明后封片干燥，光学显微镜下观察。
1.3 统计学分析:全部计量数据资料均以均数士标准差(x士s)表示。采用SPSS11.5统计软件包进行数据处理。检验水平0.05，P<0.05为差异显著，<0.01为差异非常显著。
2 实验结果
2.1 各组软骨细胞增殖的情况
表1各组软骨细胞增殖的情况(x士s)
表1结果显示：各组24小时内作用无明显差异(P>0.05)；40ug/ml组、80ug/ml组从48小时后测得的OD值比空白对照组的OD值均高，且差异有统计学意义(P<0.05)；其中以80ug/ml组的对关节软骨细胞增殖最为显著，尤其在第4d、第8d时尤为明显，OD值分别比空白对照组高26.38%和22.53%。40ug/ml组与80ug/ml组比较，测得OD值80ug/ml均比40ug/m组高，但是两者间比较无统计学差异(P>0.05)。
甲苯胺蓝染色，细胞培养一周后：细胞胞浆中有不同程度的紫红色颗粒，为体外培养软骨细胞分泌蛋白多糖。结果见图。
3 讨论
七叶亭作为天然药物秦皮的有效活性成分有着重要的药理作用。秦皮经常出现在抗骨关节炎的中药方剂中，但其具体机制尚不十分清楚。秦皮的主要有效成分是秦皮甲素(七叶灵)及七叶亭(也称秦皮乙素，秦皮素，七叶内脂，6、7一二羟基香豆素等)2 ......
(武警四川总队医院 614000)
【摘要】方法：本研究通过MTT法观察七叶亭对体外培养关节软骨细胞增殖的影响。设立A组：阴性对照组(空白对照组),B组：阳性对照组(40ug/ml),C组：阳性对照组(80ug/ml)。结果：40ug/ml组，80ug/ml组从48小时后测得的OD值比空白对照组的OD值均高，且差异有显著性(P<0.05)；其中以80ug/ml组的对关节软骨细胞增殖最为显著，尤其在第4d、第8d时尤为明显，OD值分别比空白对照组高26.38%和22.53%。结论：本实验结果显示七叶亭能促进软骨细胞的增殖，以80ug/ml组最为明显。
【关键词】七叶亭;关节软骨; 细胞增殖
【中图分类号】R216.89【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)09-0258-02
1 材料和方法
1.1 实验材料：(1)实验动物：三周龄新西兰大耳白幼兔，雌性，三只，体重为180士10g。(2)实验药物：含七叶亭细胞培养液，浓度分别为40ug/ml，80ug/ml；甲苯胺蓝作为染色观察剂。
1.2 实验方法：取三周龄雌性健康新西兰幼兔三只，空气注射致死，75%乙醇中浸泡三分钟消毒,无菌条件下切取股骨头及股骨骼部关节面软骨,软骨细胞的分离参考王跃l的方法。软骨细胞融合约90%左右时开始传代，软骨细胞培养采用消化法。将分离培养的软骨细胞随机分为三组，分别放入不同浓度的七叶亭细胞培养液中：A组：阴性对照组(空白对照组)；B组：阳性对照组(40ug/ml)；C组：阳性对照组(80ug/ml)。
用MTT法测定软骨细胞增殖，每日同时间在上述细胞培养板中加入5mg/m1的MTT15ul，于37℃饱和湿度培养箱内继续培养4h，弃去培养液，加入DMSO150ul充分混匀后，用酶标仪在57Onm波长处读取OD值。连续测量8天。软骨细胞培养一周后，吸弃培养板内的培养液，将细胞玻片置于甲苯胺蓝染色液中染色5分钟，流水冲洗1分钟后，用蒸馏水冲洗1分钟，依次置于95%酒精(2次)及无水酒精中梯度脱水，每次3分钟，二甲苯透明后封片干燥，光学显微镜下观察。
1.3 统计学分析:全部计量数据资料均以均数士标准差(x士s)表示。采用SPSS11.5统计软件包进行数据处理。检验水平0.05，P<0.05为差异显著，<0.01为差异非常显著。
2 实验结果
2.1 各组软骨细胞增殖的情况
表1各组软骨细胞增殖的情况(x士s)
表1结果显示：各组24小时内作用无明显差异(P>0.05)；40ug/ml组、80ug/ml组从48小时后测得的OD值比空白对照组的OD值均高，且差异有统计学意义(P<0.05)；其中以80ug/ml组的对关节软骨细胞增殖最为显著，尤其在第4d、第8d时尤为明显，OD值分别比空白对照组高26.38%和22.53%。40ug/ml组与80ug/ml组比较，测得OD值80ug/ml均比40ug/m组高，但是两者间比较无统计学差异(P>0.05)。
甲苯胺蓝染色，细胞培养一周后：细胞胞浆中有不同程度的紫红色颗粒，为体外培养软骨细胞分泌蛋白多糖。结果见图。
3 讨论
七叶亭作为天然药物秦皮的有效活性成分有着重要的药理作用。秦皮经常出现在抗骨关节炎的中药方剂中，但其具体机制尚不十分清楚。秦皮的主要有效成分是秦皮甲素(七叶灵)及七叶亭(也称秦皮乙素，秦皮素，七叶内脂，6、7一二羟基香豆素等)2 ......
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