三种方法检测乙肝表面抗原结果的比较
【摘要】目的：通过乙肝表面抗原，比较三种方法学的优缺点。方法：采用化学发光法检测乙肝，然后对阳性标本分别用酶联免疫吸附试验和金标方法复检。结果：总数为13207份标本，化学发光方法检测表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。结论：灵敏度化学发光方法最高、ELISA方法居中、金标方法最差；操作金标方法最简单、ELISA居中、化学发光方法稍难；金标方法假阴性假阳性率最高。因此，金标方法只能进行筛检，阳性或阴性都不能定诊。
【关键词】乙肝表面抗原；化学发光法；ELISA；金标法
【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0156-01
中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查,人群发生率较高,表面抗原携带率约为15%[1]。乙肝的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是由Dane颗粒的外壳和直径22nm的球型颗粒和管型颗粒所组成[1]。HBsAg是HBV感染后第一个出现的血清学标志物,也是诊断的重要指标之一。HBsAg阳性见于急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者。值得注意的是在急性感染的恢复期,存在核心窗口期现象,即该时期HBsAg消失,抗-HBs还未出现的,此期可短至数天或长达数月。
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目前检测乙肝有三种比较常用的方法学，即酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标法、化学发光法。中国大多数临床实验室都采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法来检测HBsAg。但对于HBsAg低浓度的标本,检测时常因方法学的原因造成灵敏度较低,导致临床出现漏检,给病人带来损失,尤其是需要临床输血的病人。；金标法(Goldimmnnochromatography，GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术，由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，也广泛应用于HBsAg的初筛；缺点式是此种方法灵敏度比ELISA更低，而且假阳性率、假阴性率都很高。近年来发展起来的化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)是灵敏度非常高的方法。解决了低浓度HBsAg的检测问题。现将三种种方法对乙肝表面抗原的检测作一比较。
1资料和方法
1.1标本来源：
收集牡丹江医学院红旗医院检验科免疫室2010年全年常规做乙肝“二对半”标本13207份，用半自动化学发光方法筛出乙肝表面抗原阳性的标本1515份进行复检，并通过金标法和酶联方法进行比较。
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1.2方法：
半自动化学发光方法原理：采用酶促化学发光，双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化鲁米诺发光，并在化学发光仪上读出发光值并计算含量，此种方法为定量方法。
金标方法原理：试剂条以胶体金为指示标记包被特异的抗体,应用免疫层析双抗体夹心原理检测样本中的乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)法原理：采用双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化TMB和过氧化氢产生有色物质，加入酸性终止液后用酶标仪读取光密度值进行计算并判断阴阳性，此种方法未定性方法。
2试剂与仪器
半自动化学发光仪器为GloRunner型半自动化学发光仪，配套试剂为北京科美化学发光试剂。金标试剂为广州万孚乙肝二对半金标板。ELISA试剂为上海科华试剂，酶标仪为Bio-TekELX800，洗板机为ELx50洗板机。
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3检测
所有标本先由半自动化学发光仪进行表面抗原检测，阳性标本再用ELISA和金表方法进行检测。所有检测严格按照标准SOP操作文件进行操作，质控品由黑龙江省临检中心提供。
4结果
总数为13207份标本，半自动化学发光方法表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。
5讨论
从以上结果来看，半自动化学发光法阳性率最高，ELISA方法较化学发光法阳性率低，金标方法阳性率最低。化学发光方法要比ELISA方法敏感，化学发光方法检测弱阳性标本用ELISA方法检测呈现阴性，同样ELISA方法检测弱阳性的标本用金标方法同样也呈现阴性。ELISA方法是国内主要检测乙肝的方法，是一种操作步骤比较简单，灵敏度表较高的方法，所用仪器酶标仪的价格也不是很高，甚至目测也可以报结果。金标法操作最为简单，不需要任何仪器，很适合快速的筛检，但是此种方法的缺点也很明显，检测的灵敏度不高，存在一定假阳性率的问题，金标方法检测的结果，阴形可能存在假阴性，阳性也需要进行复检。在实际工作中，曾经有过金标表面抗原强阳性，但是经过化学发光和酶联免疫方法测定，变为阴性。因此金标方法检测的结果不能作为定诊的依据，必须经过其他的方法进行验证，只能作为乙肝的筛检，其结果还必须进行确认。化学发光法是近年发展比较快的检测方法学，我们所用的半自动化学发光方法采用的是酶促化学发光法，其基本的检测操作与ELISA方法一致，只有最后进行检测的时候加入的酶促底物不一样，ELISA加入的是TMB和双氧水，而酶促化学发光加入的是鲁米诺和双氧水。ELISA用酶标仪检测或根据检测孔的颜色进行目测判断结果；而酶促化学发光方法必须用化学发光仪进行定性或定量分析检测。化学发光方法检测灵敏度要高于ELISA，对于ELISA方法检测弱阳性的标本可以用化学发光方法进行复检并且进行定诊。酶促化学发光方法与ELISA方法操作步骤相当，敏感度却高很多。缺点是酶促化学发光方法检测必须依靠机器，不可以用肉眼观察结果。另外，加入酶促底物后，发光值会随着时间的延长而进行性衰减，因此化学发光法进行读取数据时必须在规定的时间内读取。经过我们监测发现，化学发光读取发光值时即使在规定的读取时间内，每隔1分钟检测一次发光值，同一孔在不同的时间点上的发光只相差很多，因此化学发光对于发光值的读取最好在加入底物后同一时间进行读取，这一点对于定量检测比较好。
参考文献
[1]化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝表面抗原的比较
[2]刘秀琴,傅杭州,张晓俐《海南医学》2010年第21卷第8期, 百拇医药(金大伟 富宏然 高莉莉)
【关键词】乙肝表面抗原；化学发光法；ELISA；金标法
【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0156-01
中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查,人群发生率较高,表面抗原携带率约为15%[1]。乙肝的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是由Dane颗粒的外壳和直径22nm的球型颗粒和管型颗粒所组成[1]。HBsAg是HBV感染后第一个出现的血清学标志物,也是诊断的重要指标之一。HBsAg阳性见于急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者。值得注意的是在急性感染的恢复期,存在核心窗口期现象,即该时期HBsAg消失,抗-HBs还未出现的,此期可短至数天或长达数月。
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目前检测乙肝有三种比较常用的方法学，即酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标法、化学发光法。中国大多数临床实验室都采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法来检测HBsAg。但对于HBsAg低浓度的标本,检测时常因方法学的原因造成灵敏度较低,导致临床出现漏检,给病人带来损失,尤其是需要临床输血的病人。；金标法(Goldimmnnochromatography，GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术，由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，也广泛应用于HBsAg的初筛；缺点式是此种方法灵敏度比ELISA更低，而且假阳性率、假阴性率都很高。近年来发展起来的化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)是灵敏度非常高的方法。解决了低浓度HBsAg的检测问题。现将三种种方法对乙肝表面抗原的检测作一比较。
1资料和方法
1.1标本来源：
收集牡丹江医学院红旗医院检验科免疫室2010年全年常规做乙肝“二对半”标本13207份，用半自动化学发光方法筛出乙肝表面抗原阳性的标本1515份进行复检，并通过金标法和酶联方法进行比较。
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1.2方法：
半自动化学发光方法原理：采用酶促化学发光，双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化鲁米诺发光，并在化学发光仪上读出发光值并计算含量，此种方法为定量方法。
金标方法原理：试剂条以胶体金为指示标记包被特异的抗体,应用免疫层析双抗体夹心原理检测样本中的乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)法原理：采用双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化TMB和过氧化氢产生有色物质，加入酸性终止液后用酶标仪读取光密度值进行计算并判断阴阳性，此种方法未定性方法。
2试剂与仪器
半自动化学发光仪器为GloRunner型半自动化学发光仪，配套试剂为北京科美化学发光试剂。金标试剂为广州万孚乙肝二对半金标板。ELISA试剂为上海科华试剂，酶标仪为Bio-TekELX800，洗板机为ELx50洗板机。
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3检测
所有标本先由半自动化学发光仪进行表面抗原检测，阳性标本再用ELISA和金表方法进行检测。所有检测严格按照标准SOP操作文件进行操作，质控品由黑龙江省临检中心提供。
4结果
总数为13207份标本，半自动化学发光方法表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。
5讨论
从以上结果来看，半自动化学发光法阳性率最高，ELISA方法较化学发光法阳性率低，金标方法阳性率最低。化学发光方法要比ELISA方法敏感，化学发光方法检测弱阳性标本用ELISA方法检测呈现阴性，同样ELISA方法检测弱阳性的标本用金标方法同样也呈现阴性。ELISA方法是国内主要检测乙肝的方法，是一种操作步骤比较简单，灵敏度表较高的方法，所用仪器酶标仪的价格也不是很高，甚至目测也可以报结果。金标法操作最为简单，不需要任何仪器，很适合快速的筛检，但是此种方法的缺点也很明显，检测的灵敏度不高，存在一定假阳性率的问题，金标方法检测的结果，阴形可能存在假阴性，阳性也需要进行复检。在实际工作中，曾经有过金标表面抗原强阳性，但是经过化学发光和酶联免疫方法测定，变为阴性。因此金标方法检测的结果不能作为定诊的依据，必须经过其他的方法进行验证，只能作为乙肝的筛检，其结果还必须进行确认。化学发光法是近年发展比较快的检测方法学，我们所用的半自动化学发光方法采用的是酶促化学发光法，其基本的检测操作与ELISA方法一致，只有最后进行检测的时候加入的酶促底物不一样，ELISA加入的是TMB和双氧水，而酶促化学发光加入的是鲁米诺和双氧水。ELISA用酶标仪检测或根据检测孔的颜色进行目测判断结果；而酶促化学发光方法必须用化学发光仪进行定性或定量分析检测。化学发光方法检测灵敏度要高于ELISA，对于ELISA方法检测弱阳性的标本可以用化学发光方法进行复检并且进行定诊。酶促化学发光方法与ELISA方法操作步骤相当，敏感度却高很多。缺点是酶促化学发光方法检测必须依靠机器，不可以用肉眼观察结果。另外，加入酶促底物后，发光值会随着时间的延长而进行性衰减，因此化学发光法进行读取数据时必须在规定的时间内读取。经过我们监测发现，化学发光读取发光值时即使在规定的读取时间内，每隔1分钟检测一次发光值，同一孔在不同的时间点上的发光只相差很多，因此化学发光对于发光值的读取最好在加入底物后同一时间进行读取，这一点对于定量检测比较好。
参考文献
[1]化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝表面抗原的比较
[2]刘秀琴,傅杭州,张晓俐《海南医学》2010年第21卷第8期, 百拇医药(金大伟 富宏然 高莉莉)