结核菌分离培养方法对照与分析
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【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2010)03 - 131 - 02
结核病是人类最古老但至今仍不能控制的疾病,其病程长.病死率高,而结核菌分裂周期长,生长繁殖缓慢.给临床诊断和治疗带来许多困难。因此结核工作者高度关注和重视结核菌的培养。本文使用传统罗氏培养法与BacT ALERT3D培养系统进行对照试验,现将结果分析报告如下。
1 酸性改良罗氏培养基成分及其制备
1.1 酸性改良罗氏培养基成分
KH2PO44.0g
MgSO40.4g
柠檬酸镁1.0g
谷氨酸钠 6.0g
甘油20ml
马铃薯粉30g
2% 孔雀石绿20ml
全卵液1000ml
蒸馏水600ml
1.2 制作方法(1)基础液制备:量取蒸馏水600ml,加入无机盐成分,谷氨酸钠和甘油溶解后加入马铃薯粉,混匀,沸水浴1h(不时搅拌),冷却。(2)新鲜鸡蛋卵液制备:用75%乙醇将鸡蛋的壳拭净(10个鸡蛋约500g)以无菌操作将鸡蛋打入一个灭菌的三角烧瓶中,用预先高压的玻璃棒打碎鸡蛋,搅匀,通过消毒的纱布过滤成卵液。(3)分装:将600ml基础液和1000ml新鲜鸡蛋卵液混匀,加入2% 孔雀石绿20ml,混匀,静置1 h。在无菌条件下,分装到灭菌的螺口试管中,(8ml/管)。(4)灭菌:将试管盖略旋松,85℃,1 h,蒸汽灭菌(试管倾斜)。置37℃培养24 h,使芽孢复性;重复该步一次后,将余下的芽孢杀灭,旋紧管口。
1.3 储存4℃保存备用。
1.4 BacT ALERT3D培养基美国BD公司生产。
1.5 痰液标本前处理、接种、结果观察取我院临床确诊患者痰标本。采用半胱氨酸一氢氧化钠法前处理(半胱氨酸临用时配制)。处理好的痰液依次加入2支酸性罗氏培养基各0.1 m1加入BacT ALERT3D(预先以75%酒精消毒瓶口,待自然风干后,加入0.25ml抗生素补充剂)0.5ml。BacTALERT3D培养管置仪器养,除非阳性(涂片、抗酸染色确认),阴性标本42 d报告结果。酸性罗氏斜面培养基平卧放置37℃培养箱24 h.然后直立放置,接种后3、7 d各观察1次.看有无细菌生长及杂菌污染,继续培养直至生长出肉眼可见的结核菌苗落、涂片、抗酸染色确认,同时接种标准菌株H37Rv做阳性对照。
1.6 统计学处理阳性率比较采用r检验,敏感性、特异性用诊断性试验四格表计算法。
2 结 果
2.1 分离培养结果100例临床标本中罗氏分离出结核菌40例,阳性率40%。与国内报道一致[1]。3D分离出结核苗38例,阳性率38%。其中罗氏培养阳性3例中3D培养阴性2例.另1例经延长1周后3D转为阳性。
2.2 平均阳性报告时间罗氏培养时间11～52 d。平均阳性报告时间22.2 d; 3D培养系统培养时间7～49 d(1例是在第49天培养瓶底颜色变黄后.经涂片确认为阳性的)。平均阳性报告时间16.9 d。
2.3 污染率罗氏培养基单管污染3例,两管和3D同时污染1例, 3D单独污染3例。罗氏污染率(包括单管)为3.0%,污染菌多为真菌,偶见革兰阴性杆菌。3D培养系统污染率4.0%,污染菌以革兰阴性杆菌、葡萄球菌为主。
2.4 两周内阳性率酸性改良罗氏15.2%,ALERT3D机器55.8%。3周内阳性率分别为:56.8%、70.8%。4周内阳性率分别为:78.8%、90.3%。5周内阳性率分别为93.9%、93.8%。从阳性报告的阳性率可以看出在第2周和第4周时间段.3D机器培养法分别为55.8%和90.3%.高出酸性改良罗氏法,酸性改良罗氏与机器法比较阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。在第2周内琼脂斜面阳性报告时间也明显高于罗氏法.而随着时间延长到第5周时,各培养阳性报告时问比例趋向于接近。酸性改良罗氏与机器法比较阳性率差异无统计学意义(分别为P>O ......
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