RP—HPLC测定止痛膏中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量
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参见附件。
摘要:目的 建立测定止痛膏中大黄酸、大黄素和大黄酚含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法,十八烷基键合硅胶柱分离大黄酸、大黄素和大黄酚,以甲醇-水(85∶15)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长254 nm。结果 大黄酸在0.208~1.040 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 0,n=5),平均加样回收率为98.37%(RSD=0.57%, n=5);大黄素在0.192~0.96 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 7,n=5),平均加样回收率为98.45%(RSD=0.99%, n=5);大黄酚在0.596~2.980 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 5,n=5),平均加样回收率为98.18%(RSD=1.50%,n=5)。结论 本方法简单、灵敏、准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制。
关键词:止痛膏;大黄酸;大黄素;大黄酚;反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2012)07-0052-02
止痛膏为本院院内制剂,由大黄、浙贝母、冰片、木香等中药组成,具有消肿、止痛功效,临床应用30余年。为有效控制该产品的内在质量,保证临床疗效,笔者在原有大黄定性鉴别的基础上,通过试验筛选出了主药大黄的定量测定方法。本试验采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对该制剂中大黄的有效成分大黄酸、大黄素、大黄酚进行含量测定,现报道如下。
1 仪器与试药
美国Waters 1525高效液相色谱仪,Waters 2487紫外检测器,Bree色谱工作站;天津HS6150型超声波清洗器,METTLER AE240电子天平。
甲醇(色谱纯),水为纯净水,大黄酸、大黄素、大黄酚对照品均购自中国药品生物制品检定所(批号分别为0773-9809、0756-9908、796-9302),止痛膏由本院制剂室提供(批号为20110706、20110519、20110316)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.2 对照品溶液的制备
精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚对照品适量,加甲醇制成每1 mL分别含104、96、298 ?g的溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
2.4 阴性对照试验
2.5 线性关系考察
2.6 精密度试验
取同一浓度对照品溶液,在上述色谱条件下,重复进样5次,计算峰面积,结果大黄酸RSD=0.85%,大黄素RSD=0.62%,大黄酚RSD=0.58%。表明精密度良好。
2.7 稳定性试验
精密吸取新鲜配制的供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、12 h进样,测定峰面积,大黄酸、大黄素、大黄酚峰面积RSD分别为1.25%、1.56%、1.20%。表明供试品在12 h内稳定性较好。
2.8 重复性试验
2.9 加样回收率试验
2.10 样品含量测定
3 讨论
分别取大黄酸、大黄素、大黄酚对照品溶液在200~400 nm波长范围内扫描,结果3种有效成分在254 nm波长处均具有最大吸收,且样品中其他成分在此波长处对测定无干扰,灵敏度高,可同时测定3种成分,故测定波长选定为254 nm。
本试验参考文献[1],通过加甲醇超声处理5 min再加硫酸超声,与回流20 min再加硫酸超声比较,然后两步同时采用回流30 min,结果表明,本试验采用的样品处理方法分离度好,无干扰。
三黄膏制剂以大黄为君药,大黄是甘肃道地药材,大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等均为大黄中的活性成分,由于对照品不足,本试验只测定了3种活性成分的含量,以作为本制剂的质量控制指标。
本试验结果表明,采用RP-HPLC测定具有便捷、灵敏、准确和重复性好的特点,适用于三黄膏制剂的质量控制。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:22-23.
(收稿日期:2011-10-27,编辑:陈静)
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