抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子—β和Ⅰ型胶原的抑制作用(2)
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2.4 分组
正常血清组：用DMEM培养基稀释使正常大鼠血清占10%；福辛普利组：用DMEM培养基稀释使福辛普利药物血清占10%；抗纤灵组：用DMEM培养基稀释使抗纤灵药物血清占10%；TGF-β1组：用含10%正常大鼠血清稀释，使TGF-β1终浓度为2 ng/mL；TGF-β1+福辛普利组：用含10%福辛普利药物血清稀释，使TGF-β终浓度为2 ng/mL；TGF-β1+抗纤灵组：用含10%抗纤灵药物血清稀释，使TGF-β终浓度为2 ng/mL。
2.5 观察指标
2.5.1 骨髓来源的成纤维细胞增殖测定 采用MTT法，经免疫荧光双染色鉴定含骨髓来源的FBS后，传代，培养，取第三代骨髓来源的FBS做实验。细胞生长融合到85%～90%时，消化细胞，用培养液配成单细胞悬液，以每孔10×104/mL个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100 ?L。待细胞贴壁后，吸去培养板中的培养液，每孔加入无血清的DMEM培养液1 mL，置37 ℃、5%CO2孵箱中孵育24 h，使细胞生长同步化。加入TGF-β1生长因子，作用24 h后吸去培养板中的培养液，加入药物血清，培养24 h后，每孔加入MTT溶液(5 mg/mL)10 ?L，37 ℃继续孵育4 h，终止培养，小心吸去孔内培养上清液(尽量洗净残留的培养液)。每孔加入100 ?L DMSO，振荡10 min，使针状结晶充分溶解。选择490 nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值(OD值)。
2.5.2 酶联免疫吸附检测骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β和Ⅰ型胶原蛋白表达 细胞生长同步化同“2.5.1”。加入TGF-β1生长因子，作用24 h后吸去培养板中的培养液 ......
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