三物白散对胃癌SGC—7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响(2)
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参见附件。
总RNA的制备：采用Trizol法提取SGC-7901胃癌细胞总RNA。RNA反转录：按试剂盒说明书进行，cDNA置-20 ℃保存。PCR扩增反应：反应体系为2×PCR Master 10 ?L，cDNA模板1 ?L， survivin上下游引物(上游引物5'-TTGCCAGAGCCA CGAACC-3'，下游引物5'-TGGAACCTCACCCATAGCC-3')、GAPDH上下游引物(上游引物5'-AGGCCGGTGCTGAGTATGTC-3'，下游引物5'-TGCCT GCTTCACCACCTTCT-3')各1 ?L，补充ddH2O至总体积20 ?L。置PCR扩增仪上扩增：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性40 s，60 ℃退火40 s，72 ℃延伸45 s，25个循环；72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析仪分析结果，计算survivin mRNA与相应的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的比值。
3 统计学方法
采用SPSS16.0统计软件进行数据处理，计量资料用—x±s表示，多样本均数间比较用方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 荧光染色检测胃癌细胞的凋亡
荧光染色检测凋亡细胞结果显示，不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后，与生理盐水对照组相比，各组细胞的凋亡率升高，且细胞的凋亡率随三物白散药物血清浓度的增大、干预时间的延长而逐渐升高。见表1。
4.2 RT-PCR检测survivin mRNA的表达
RT-PCR检测三物白散药物血清对SGC-7901细胞survivin mRNA表达的变化(见图1)，凝胶成像分析仪分析结果(见表2) ......
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