感甦合剂的提取工艺研究(2)
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2.4.5 测定法 取上述对照品溶液和供试品溶液，精密吸取5 ?L注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，采用外标一点法计算葛根素含量。葛根素对照品溶液和供试品溶液在色谱图的相同保留时间处出现相应的色谱峰，且分离度大于1.5，见图2。
2.5 干膏收率
分别精密量取“2.2”项下浓缩液各20 mL，分别置于已干燥至恒重的蒸发皿中(设重量为M1)，水浴蒸干，残渣于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称重，记录重量(设恒重后蒸发皿重量为M2)，计算干膏收率[4]。
2.6 结果与分析
以绿原酸含量、葛根素含量及干膏收率三者综合加权评分为指标，考察各因素对提取工艺的影响。综合评分=(绿原酸含量/绿原酸含量最大值)×35+(葛根素含量/葛根素含量最大值)×35+(干膏收率/干膏收率最大值)×30。正交试验结果见表2，方差分析见表3、表4。
由表2直观分析可知，影响提取效果的因素顺序为提取次数(C)>加水量(A)>提取时间(B)，最佳提取工艺为A3B3C1。由表3和表4方差分析可知，提取次数(C)对提取效果有统计学意义，且影响极为显著，为主要因素；加水量(A)、提取时间(B)对提取效果的影响无统计学意义，为次要因素。直观分析、方差分析及生产实际情况综合考虑，将加水量调整为6倍节约成本，提取时间调整为1 h简化工艺。因此，最优提取工艺为A1B1C1，即6倍加水量，煎煮3次，每次煎煮1 h。
2.7 验证试验
为验证优选的提取工艺是否稳定、合理、可行，按上述最优提取工艺A1B1C1，按处方比例放大10倍，进行3批次重复提取试验，结果见表5。
由表5可知，3批样品绿原酸转移率为86.279 4%、平均含量为3.345 0%，葛根素转移率为86.567 3%、平均含量为0.255 6%，干膏平均收率为32.096 1%，且RSD均小于5.00%，表明该提取工艺稳定、合理、可行。
3 讨论
对金银花、竹叶柴胡药材进行绿原酸含量测定，竹叶柴胡中绿原酸含量为0.036 6%、金银花中绿原酸含量为3.878 7%；按处方比例计算，处方中竹叶柴胡所含绿原酸量仅为绿原酸总量的0.625 1%，因此，在计算绿原酸转移率时可忽略不计。
方中药材成分水溶性强，出膏率大，因而将干膏收率作为评价指标之一，并在综合加权评分时赋予干膏收率30%的比重；同时本指标的考察也为后期浓缩工艺和澄清工艺的研究提供试验依据。
采用单因素法考察了不同流速(0.8、1.0 mL/min)、柱温(25、30 ℃)及流动相[甲醇-水(27∶73)、甲醇-水(36∶64)]对葛根素含量测定的影响。其他条件相同，流速为0.8 mL/min时，对照品和样品的塔板数及分离度均高于流速为1.0 mL/min时；其他条件相同，柱温为30 ℃时，对照品和样品的主峰对称因子和塔板数高于柱温为25 ℃时；其他条件相同，流动相为甲醇-水(27∶73)时，样品主峰的对称因子较流动相为甲醇-水(36∶64)时高。最终选定流速0.8 mL/min、柱温30 ℃、流动相甲醇-水(27∶73)为葛根素含量测定条件。
参考文献：
[1] 张兆旺.中药药剂学[M].北京：中国中医药出版社，2003：184.
[2] 周海燕，李丹.高效液相色谱法测定清开灵注射液中绿原酸含量[J].中国药业，2011，20(1)：36.
[3] 徐强，章曙丹，冯瑛.HPLC测定糖肾颗粒中葛根素的含量[J].中成药， 2007，29(4)：621-623.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅩA.
(收稿日期：2012-05-24，编辑：陈静)
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