高效毛细管电泳法测定灯盏花素固体分散体中野黄芩苷含量(2)
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参见附件。
2.8 样品含量测定
取灯盏花素固体分散体5批，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定。5批样品中野黄芩苷含量测定结果见表2。
3 讨论
未涂层弹性石英毛细管柱是目前中药及其制剂分析中常用的毛细管柱，笔者以检验灵敏度、分离效果为指标对将该类型内径为25、50、75 ?m毛细管柱进行比较，最终选择内径为75 ?m毛细管柱。
野黄芩苷极性较强，容易离子化；而在硼砂溶液中，野黄芩苷中邻二羟基基团更易形成络离子，加快离子化。因此选择硼砂溶液为运行缓冲液，并通过试验确定其最佳浓度为40 mmol/L。
灯盏花素属黄酮类成分，主要含有野黄芩苷，其7位上连接一葡萄糖醛酸，在5，6，4’位上有3个羟基，因此具有较强的酸性，在碱性介质中易溶，故摸索条件在pH值8～9之间进行。试验分析表明，在pH值8～9时，野黄芩苷的峰可以得到很好分离，但在pH值9时野黄芩苷峰形较为尖锐对称，故选择缓冲液的pH值为9。
在上述缓冲液条件下考察分离电压在15～25 kV范围内对分离度的影响，随着工作电压的升高，基线噪声增加，使检测灵敏度降低，当工作电压超过20 kV后这种影响变得明显。综合考虑分离度、峰高和灵敏度等因素，故选择20 kV为工作电压。毛细管柱温升高，分离时间几乎呈平行线性递减，说明分离时间随温度的变化率是不变的，因此选用25 ℃为柱温。
预试验对野黄芩苷进行全波长检测，筛选出215、254、280、335 nm进行进一步分析考察，综合基线平滑度、柱效、分离度等因素，选择280 nm为检测波长。
参考文献：
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(收稿日期：2012-04-28，编辑：陈静)
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