止消通脉宁干预转化生长因子—β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究(2)
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传代培养的HK-2细胞分为6组。空白对照组：DMEM/F12培养液；TGF-β1诱导组：DMEM/F12培养液+10 ng/mL TGF-β1；空白血清对照组：DMEM/F12培养液+10 ng/mL TGF-β1+10%空白血清；干预1组：DMEM/F12培养液+10 ng/mL TGF-β1+10%低剂量止消通脉宁药物血清；干预2组：DMEM/F12培养液+10 ng/mL TGF-β1+10%中剂量止消通脉宁药物血清；干预3组：DMEM/F12培养液+10 ng/mL TGF-β1+10%高剂量止消通脉宁药物血清。
2.3 指标检测
2.3.1 细胞免疫化学法检测人肾小管上皮细胞、α-平滑肌肌动蛋白、E-钙黏蛋白的表达
2.3.1.1 盖玻片包被 18 mm×18 mm盖玻片切割成1/4大小，自来水浸2 h，风干后浓硫酸浸泡过夜，自来水清洗干净，95%乙醇浸泡12 h，高压灭菌。使用前将灭菌后的玻片置于24孔板，滴加0.1 mg/mL无菌多聚左旋赖氨酸浸没盖玻片，包被5 min，使多聚赖氨酸充分黏附在盖玻片上，吸干多聚赖氨酸，无菌水彻底冲洗，超净台风干，紫外线照射20 min灭菌备用。
2.3.1.2 细胞爬片制备 于24孔板中包被盖玻片后，细胞以2×104个/mL密度接种，每孔1 mL，孵育24 h，吸弃细胞上清，加入无血清培养液1 mL静止24 h，使其同步化。弃细胞上清，按分组加入含相应浓度药品的培养液，每孔1 mL，继续培养24 h。取出细胞爬片，用0.01 mol/L PBS漂洗5 min×3次。4%多聚甲醛固定20 min，-20 ℃保存备用。
2.3.1.3 细胞免疫化学法染色 3%H2O2去离子水(无色液体)室温孵育10 min ......
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