益气活血解毒中药联合树突状细胞疫苗对荷瘤小鼠免疫抑制的调控(2)
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参见附件。
1.8 免疫组化检测
将小鼠肿瘤组织和脾脏用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精伊红(HE)染色，光镜观察。采用免疫组化SP法检测小鼠肿瘤组织中TGF-β1、IL-10的表达情况及脾脏中CD4+、CD8+ T细胞的浸润情况。
1.9 结果判定
所有标本均采用麦克奥迪医学图像分析软件进行定量分析。细胞浆、胞膜和/或胞外被染成棕黄色为阳性反应，显微镜下观察棕黄色染色深浅及染色范围，用平均光密度值(OD值)表示TGF-β1和IL-10表达情况。显微镜下观察CD4+、CD8+ T细胞，每例标本分别在显微镜下进行细胞计数，胞膜及胞浆染色明显者计为阳性，用每个视野下阳性细胞数所占整个视野细胞总数的百分比表示该细胞所占的百分比，计算阳性细胞的百分数，每组计数10个视野。
1.10 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，所有数据用—x±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 鼠骨髓来源的树突状细胞形态观察
采用倒置显微镜观察，第1-3日，骨髓来源细胞多数为贴壁生长，细胞体积小，圆形透亮，散在分布；第4-5日，细胞数量增加，部分细胞体积增大，呈半悬浮生长并聚集成团；第5-7日，细胞数量明显增多，部分细胞可见树突状突起或毛刺状突起，大部分悬浮生长(见图1)。
2.2 流式细胞仪鉴定树突状细胞
取培养7 d的DC标记后通过流式细胞仪检测，CD11c+CD86+DC纯度为89%，表明为典型成熟DC。
2.3 中药联合树突状细胞疫苗对小鼠移植瘤瘤质量及抑瘤率的影响
各用药组瘤质量均低于对照组 ......
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