六味地黄汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织缺氧诱导因子1α及相关因子表达的影响(2)
1.7.3 RT-PCR检测 用Trizol法提取总RNA，于15 ?L反应体系中进行反转录反应合成cDNA，PCR扩增目的基因HIF-1α、PDGF-A、PDGF-B及内参基因β-actin片段。引物设计与合成：按GenBank数据库检索目的序列，Primer引物设计与分析软件设计引物。引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成。反应条件：94 ℃变性5 min，循环采用94 ℃变性0.5 min，56 ℃退火0.5 min，72 ℃延伸0.5 min，35个循环后，72 ℃延伸10 min。引物序列：HIF-1α上游5’-GTTTACTAAA GGACAAGTCACC-3’，下游5’-TTCTGTTTGTTGAAGGGAG-3’；PDGF-A上游5’-GAGATACCCCGGGAGTTGAT-3’，下游5’-AAATGACCGTCCT GGTCTTG-3’；PDGF-B上游5’-CCCACAGTGGCTTTTCATTT-3’，下游5’-GTGGA GGAGCAGACTGAAGG-3’；内参(β-actin1)上游5’-CGTGGACATCCGCAAAGAC-3’ ......
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