麝香对颅骨骨缺损模型大鼠单核细胞趋化蛋白1表达的影响(2)
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成骨诱导：细胞传至P2代时，利用成骨诱导液(10 mmol/L的β-甘油磷酸钠，1×10-7 mol/L地塞米松，50 ?g/mL抗坏血酸)进行诱导，25 d后利用4%多聚甲醛固定10 min，蒸馏水漂洗3次。5%硫代硫酸钠孵育30 min，蒸馏水冲洗，加入1%硝酸银溶液，紫外灯下染色30 min，蒸馏水冲洗掉浮于表面的黑色物质，继续用5%硫代硫酸钠染色20 min，蒸馏水漂洗后观察，拍片照相记录(Von kossa染色)。
1.6 颅骨骨缺损模型的建立
待细胞接近融合成单层时，实验大鼠用氯胺酮(0.1 g/kg)行腹腔麻醉后，取侧卧位，在头部右侧术野处剪毛消毒，做一纵行切口，暴露颅骨并切除局部骨膜。用牙科钻造成直径6 mm的圆形骨缺损。生理盐水冲洗骨缺损部位以去除残存骨屑，逐层缝合伤口，用碘伏消毒伤口。用0.25%胰酶(含0.02%EDTA)消化细胞，并装入1 mL无菌离心管中，离心后吸掉上清液，将其配置成1 mL (1×109 cells/mL)细胞混悬液，装入1 mL无菌离心管中待回植。回植时每只大鼠1 mL，从尾静脉注射。
1.7 分组与给药
将模型大鼠按体质量编号，采用完全随机法分为麝香高、中、低剂量组与空白组。灌胃剂量按人与大鼠体质量的折算公式计算，高、中、低剂量分别为4.2、8.6、16.8 mg/100 g。使用时将其分别溶于2.5 mL的蒸馏水中吹打成混悬液予大鼠灌服，空白组灌服等体积生理盐水，每日1次，连续灌胃14 d。
1.8 取材
灌胃14 d后脱臼处死大鼠，取出颅骨，用4%多聚甲醛固定24 h，然后放入脱钙液(10% EDTA+100 mL PBS ......
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